酵母单杂交关键技术的原理及应用.docVIP

4 5 0 IS SN 10 0 9一 30 7 9 C N 14一 1 2 60 /R 酵母单杂交技术原理及 应用 守东, 洪 源,成 军 守东 洪源 成军 中国人民解放军第3() 2 医院 传染病研究所基 因治疗研 中心 全军病毒性肝炎防 治研究关键 试验 室 北 京市 1 0 0 93 项目负贵人: 成军门 0 0 0 3 9 北京币西四环中路 1 0 0 号 中国人民解放军第 3 0 2 医院传染病研究所基因治疗研究中心 全军病毒性肝炎防治研究关键试验 e ]@ g e n e h e r a p v e o m e n 电话: 一 传真: 一 收稿日期 2 0 0 2 一 1 0 一 2 9 接纳日期二2 0 0 2 一 1 1 一 1 8 马守东洪源成军 酵母单杂交技术原理及应用 世界华人消化杂志 加30 ; 1 1 (4 ): 4 05 一 h t P : /l w w w wj n e e o 川 O 弓l言 酵母单杂交(y e a s t o n e h y b r i d )技术是体外分析 D N A 和细胞内蛋自质相互作用一种方法 , 经过对酵母细胞 内汇报基因表示状况分析 , 来判别 D N A 结合位点并发觉潜在结合蛋白基因 , 或对 D N A 结合位点进行分析利用此技术 能筛选到和 D N A 结合蛋 白质 , 并可直接从基因文库中得到编码该蛋白质核昔酸序列 , 而无需复杂蛋自质分离纯化操作 , 故在蛋白研究中 , 具 一 定优势; 而且 , 酵母属真核细胞 经过酵母系统 到结果比其它体外技术获取结果更能表现真核 细胞内基因表示调控真实情况 1 酵母单杂交技术原理 酵母单杂交技术最早是 19 93 年 由iL te la 日夕队酵母双杂 技术发展而来 酵母双杂交技术经过对汇报基因 型进行检测 以实现对蛋 自质 间相互作用 研究3[ 一 16 , 而酵母单杂交技术则经过对汇报基因表型检测 , 分析 D N A 蛋 自之间相 互作用 , 以研究真核细胞内 基因表示调控 前认为真核生物转录起始需要转录因子参 这些转录因子通 常由一个D N A 特异性结合功能域和 一个或多个 和其它调控蛋自相互作用激活功能域组 成 即 D N A 结合结构域(D N A 一 b i n d i n g d o m a i n B D ) 和 录激活结构域(a e i v a l o n d o m a i n A D ) 用于酵母单杂交 系统酵母(认 L4 蛋自即是一种典型 转录因子 研究[12 表明 ( ; A 以 D N A 结合结构域靠近梭基端, 含有多个锌 结构 , 可激活酵母半乳糖昔酶上游激活位点U( A S); 转录激活结构域可和 R N A 聚合酶或转录因子 T Fl lD 相互作用 提升 R N A 聚合酶活性 在这一过程中 , D N A 结合结构域和转录激活结构域可 完全独立地发挥 作用 据此 , 我们可将 G A 4L D N A 结合结构域置换为 其它蛋自 , 只要她能和我们想要了解目标基因相互 作用 , 就照样可 以经过其转录激活结构域激活 R N A 聚合酶 , 从而开启对下游汇报基因转录 正是基于这一  世界华人消化杂志 2 0 0 3 年 4 月 15 日 第 1 卷 第 4 期 理论 酵母单杂交系统由 2 部分组成 : ( 1)将文库蛋自 片段和 G A IA 转录激活域融合表示 C D N A 文 库质粒 ; 2( )含有 目标基因和下游汇报基因汇报质粒 在试验中, 首先将汇报质粒整合入酵母基因组, 产生带有目标基因 酵母汇报株;再将文库质粒转化人汇报株;若存在文库 蛋白和目标基因相互作用, 可经过对汇报基因表示将文库蛋白基因筛选出来 2 酵母单杂交技术应用 酵母单杂交技术是创建在很多真核转录因子在结构和功能上是由独立 D N A 结合结构域和 D N A 激活 结构域组成基础上 , 这使得研究者能够构建差别基因融合体 , 在酵母中表示融合蛋白, 以 同时结合特异目标基因和激活转录 理论上 , 在酵母单杂交技术中, 任 目标基因全部可捕捉能和目标因子特异结合蛋自][z. 现在, 酵母单杂交技术应用能够归纳为以下二类: 2 1 判别 D N A 结合位点 并发觉潜在结合蛋 白基 因 现在对 于酵母单杂交技术应用 关键表现在这方 面 C h ew te 盯 J7l 应用酵母单杂