兔骨骼肌对大段自体骨异位预构血管化骨皮瓣的影响.pdf

目 录 摘 要1 Abstract4 前 言9 1 材料和方法11 2 结果20 3 结论33 4 讨论27 附 图34 参考文献38 综述：预构组织皮瓣的研究进展43 攻读学位期间发表文章情况49 致 谢50 个人简历52 新乡医学院硕士学位论文 兔骨骼肌对大段自体骨异位预构血管化骨皮瓣的影响 摘 要 背景 随着社会的发展，各种由高能量创伤导致的开放性骨折在不断增加。开放性骨折 [1] 发病率高，术后容易导致骨感染 。经过积极的清创处理虽然能控制感染，但会遗留 大段（块）骨缺损伴皮肤软组织缺损。感染性骨缺损伴皮肤软组织损伤局部伤情复杂， [2] 一直以来都是骨科的难题 。当前主要的治疗方法，感染骨未能充分利用，治疗时间 [3-4] 长，手术次数多，术后功能差 。采用自体骨皮瓣移植不需要经过缓慢的“爬行替代” 过程，同时可以覆盖创面，填补组织缺损。但自体骨皮瓣的取材位置有限，难以满足 [5-6] 各种类型的损伤，限制了它的应用和发展 。对皮瓣进行适当修饰改造可预构不同 [7-9] 种类的组织皮瓣，使预构皮瓣能够修复各种类型的皮肤组织缺损 。临床中，将大 段 （块）自体骨异位寄养在肌肉内或者肌间隙，6-12 个月后，大段 （块）自骨可完成 [10] 血管化 。骨骼肌可以在不添加任何外源种子细胞和因子的情况下使大段 （块）骨血 [11] 管生成和增加骨活性 。肌肉内富含大量的骨诱导型细胞群体，可以分泌多种与骨折 愈合相关的细胞因子和生长因子。在预构骨皮瓣过程中，骨骼肌的血管生成与成骨作 用鲜有报道，通过对骨骼肌的深入研究，为后期保障预构骨皮瓣成活，缩短预构骨皮 瓣进程提供理论依据。 目的 探讨兔骨骼肌分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)、骨形成蛋白-2(BMP-2)规律以 及对大段自体骨异位预构血管化骨皮瓣的影响。 方法 选取70 只成年中国白兔，雌雄不限，随机挑选60 只作为实验组，采用无菌手术 的方法，截取左后肢胫骨中段1.5cm 骨段，去除髓腔内及骨段表面附着软组织，高温 水浴灭菌后将其置于右侧股直肌肌袋内预构骨皮瓣。剩余10 只作为空白对照组。实 验组于术后第2、4、6、8、10、12 周各处死10 只并取出大段自体骨及整块股直肌， 大段自体骨大体标本观察、HE 染色组织学检查、CD34 及I 型胶原蛋白免疫荧光染色 1 新乡医学院硕士学位论文 检测血管化程度与骨活性，Westernblotting 检测股直肌肌组织中VEGF、BMP-2 表达 量。空白对照组仅截取白兔左后肢胫骨中段1.5cm 骨段和右侧整块股直肌，检测指标 同实验组。 结果 1 大段自体骨大体观察结果 实验组在预构骨皮瓣过程中，切口愈合良好，周围无炎性反应。大段自体骨髓腔 两端和骨皮质表面粘附的纤维结缔组织逐渐增厚变多，与骨段贴附逐渐紧密；纤维结 缔组织剥离后，骨表面可见骨吸收陷窝，并随着时间的延长凹陷变多加深，骨皮质也 逐渐变薄。纤维结缔组织包裹骨段第8周开始与正常自体骨骨膜厚度，紧密程度相似， 都较难分离。 2 大段自体骨HE 染色结果 实验组第2 周骨表面及管腔极少见纤维肉芽组织；第4 周时骨表面出现纤维肉芽 组织，可见较小的腔隙，周围有少量新生血管和细胞成分。第6周可见更多的血管和 细胞，血管旁骨表面骨旋涡排列规律可见分化成熟的骨细胞，哈弗管腔变大，骨小梁 开始缓慢生长。实验组从第8周开始骨HE 染色情况和新鲜胫骨HE 染色相似，可见 较多血管内皮细胞和骨细胞，以及致密成熟的骨小梁。 3 大段自体骨免疫荧光检测结果 CD34免疫荧光结果显示：实验组CD34 阳性血管数量总体呈先