维生素A和维生素E的测定方法.pdfVIP

. 维生素 A 和维生素 E 的测定方法（ HPLC ） 杨月欣教授等 高效液相色谱法 最小检出量分别为 VA ：0.8ng； α-E ：91.8ng ； γ-E ：36.6ng ； δ-E ：20.6ng 。 1.原理 食物中的维生素 A 及维生素 E 经皂化提取以后，将其不可皂化的部分提取到有机溶剂中。 用 HPLC 法 测定维生素 A 及维生素 E 的含量。 2. 适用范围 GB12388-90 本法适用于各种食物和饲料的测定 3. 仪器 （1 ） 高压液相色谱仪（带紫外检测器） （2 ） 六孔恒温水浴锅 （3 ） 旋转蒸发器 （4 ） 高纯氮气 （5 ） 高速离心机 4. 试剂 本实验所用试剂皆为分析纯，所用水皆为蒸馏水 4.1 无水乙醇：重蒸，不含有醛类物质 检查方法：取 2ml 银氨溶液于试管中，加入少量乙醇，摇匀，再加入 10%氢氧化钠溶液，加热，放置 冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。 脱醛方法： 取 2g 硝酸银溶于少量水中。 取 4g 氢氧化钠溶于温乙醇中。 将两者倾入 1L 乙醇中， 振摇后， 放置暗处两天（不时摇动，促进反应），经过滤，置蒸馏瓶蒸馏，弃去初蒸出的 50ml 。当乙醇中： 4.2 10%抗坏血酸溶液（ Vc ） W/V 临用前配制 4.3 50%氢氧化钾溶液（ KOH ） W/V 4.4 无水乙醚 重蒸，不含过氧化物 4.4.1 过氧化物检查方法：用 5ml 乙醚加 1ml10%碘化钾溶液，振摇 1min，如有过氧化物则放出游离碘，水 层呈黄色或加 4 滴 0.5%淀粉液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。 4.4.2 去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放入铁丝或铁末少许。弃去 10%初馏液和 10%残馏液。 4.5 pH 1-14 试纸 4.6 无水硫酸钠 Na2SO4 4.7 甲醇 色谱纯或分析纯重蒸后使用 4.8 重蒸水 蒸馏水中加入少量高锰酸钾重蒸后使用 4.9 苯并〔 e 〕芘标准液 称取苯并〔 e 〕芘（纯度 98% ），用脱醛乙醇配制成 1ml 相当于 5 μg苯并〔 e 〕芘 的内标溶液。 4.10 维生素 A 标准液 视黄醇 （纯度85% Sigma 公司） 用脱醛乙醇溶解维生素 A 标准品， 使其浓度大约为 1ml 相当于 1mg 视黄醇。 临用前用紫外分光光度法标定其准确浓度。 维生素 E 标准液 α-生育酚 （纯度95% Sigma 公司）， δ-生育酚（纯度 95% Sigma 公司）， δ-生育酚（纯度 95% Sigma 公司）。用脱醛乙醇分 别溶解以上三种维生素 E 标准品，使其浓度大约为 1ml 相当于 1mg。临用前用紫外分光光度法分别标定此 三种维生素 E 的准确浓度。 5. 操作步骤 本实验需避光操作 (1) 样品皂化 称取样品于三角瓶中，加 30ml 无水乙醇，振摇三角瓶，使样品分散均匀。加入 5ml 10%抗 坏血酸和苯并〔 e 〕芘标准液 2ml ，混匀。最后加入 10ml 氢氧化钾边加边振摇。于沸水浴上回流 30min 使 样品皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。 (2) 样品萃取 将皂化后的样品移入分液漏斗中，用 50ml 水分 2 次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。用 10 0ml 无水乙醚分两次洗皂化瓶及残渣，乙醚液并入分液漏斗中。轻轻振摇分液漏斗 2min ，静置分层，弃去 水层。然后每次用约 100ml 水将乙醚液洗至中性，约 4-5 次。 (3) 浓缩 将乙醚提取液经无水硫酸钠（约 5g）滤入 150ml 旋转蒸发瓶