线粒体的超活染色与观察.pdfVIP

【实验目的 】 掌握动物细胞活体染色的原理和相关的技术。 【实验原理 】 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生 活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活 染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内 活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达 到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染 料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作 用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离 子或阳离子的， 这样， 它们彼此之间就发生了吸引作用。 但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用， 应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料 最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹纳 斯绿 B （Janus green B）和中性红（ neutral red ）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线 粒体和液泡系的染色各有专一性。 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态 而发生变化。 詹纳斯绿 B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细 胞色素氧化酶系的作用， 使染料始终保持氧化状态 （即有色状态），呈蓝绿色； 而线粒体周围的细胞质 中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态） 。 【实验用品 】 1、材料： 小白鼠肝脏、睾丸 2 、试剂： Ringer 溶液： NaCl 0.85g + KCl 0.25g + CaCl 2 0.03g + 蒸馏水 100ml ； 1%、1/5000 詹纳斯绿 B 溶液：称取 50mg 詹纳斯绿 B 溶于 5ml Ringer 溶液中， 30-40 ℃加热，使 之溶解，用滤纸过滤后，即为 1%原液。取 1%原液 1ml 加入 49ml Ringer 溶液，即为 1/5000 工作液装 入棕色瓶中备用。 3 、器材： 显微镜、解剖盘、剪刀、吸管、载玻片、盖玻片、擦镜纸 【实验步骤 】 3 1、 用断头法处死小白鼠， 置于解剖盘中， 剪开腹腔， 取小白鼠肝组织， 选取边缘较薄的肝组织 0.5cm ， 放入小烧杯中，用 Ringer 液冲洗去血污。 2 、 在干净的凹面载玻片的凹穴中， 滴加 1/5000 詹纳斯绿 B 溶液， 再将肝组织块移入染液中， 注意不 可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到 氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成 (—般需染 20～30min) 。 3 、 吸去染液，用眼科剪将组织块着色部分剪下重置小烧杯中，滴加 Ringer 溶液 0.5ml ，用剪刀充分 剪碎制悬液。 4 、 取上述细胞悬液滴片，加盖玻片，高倍镜下观察。 精选文档 5 、 将小鼠的睾丸连带附睾一起分离取下，放置于小烧杯中并用剪刀充分剪碎至匀浆状，滴加 1/5000 詹纳斯绿 B 溶液进行染色，重复第 4 步观察并比较肝细胞线粒体与精子线粒体鞘。 【实验结果 】 在高倍镜下观察到了小鼠肝细胞，肝细胞质中的线粒体被染成蓝绿色。每个细胞中都有一些被染 成蓝绿色的球状结构，为线粒体。另外，在观察小鼠附睾中的精子细胞可见长形的线粒体鞘也被染成