淡紫拟青霉的检测方法.docVIP

淡紫拟青霉的检测方法 检测用培养基配方与培养条件 培养基：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA培养基） 配制：以北京路桥PDA培养基为例，按说明上配制需称取培养基4克，加水100毫升 2. 培养条件：25 二、检测与计数方法 1. 系列稀释 称取适量的样品，加入带玻璃珠的三角瓶中，加入100mL的无菌水（无菌水中事先加入了分散剂3-5滴，分散剂可以是吐温，OP—10，用来分散菌团），用玻璃棒搅拌使之溶解吸水均匀后，上旋转式摇床200 r/min充分振荡60 min，,即成母液菌悬液（基础液）。 2. 用5mL无菌移液管分别吸取5mL上述母液菌悬液加入45mL无菌水中，按1:10进行系列稀释，分别得到1:1×101，1:1×102，1:1×103，1:1×104……1:k稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管，每个稀释度瓶中徐放入适量的玻璃珠以便于菌液分散均匀）。 3. 加样及培养 取1个适宜的稀释度，用移液枪吸取菌悬液0.1 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀地涂于琼脂表面。此稀释度重复3次，同时以空白作对照，于适宜的条件下培养。 4. 菌落识别 根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。 5. 菌落计数 以出现20—70个菌落数的稀释度的平板为计数标准，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。 有效活菌数按式（1）计算，同时计算杂菌数： nm = kv1/(m0v2) ×10-8?? 或? nv = kv1/(v0v2) ×10-8 ????（1） 式中： nm — 质量有效活菌数，???????? 亿/g ??????nv — 体积有效活菌数，????????亿/mL ??????— 有效菌落平均数，???????? 个 k — 稀释倍数 v1 — 基础液体积，???????????? mL v2 — 菌悬液加入量，?????????? mL v0 — 样品量，?????????? ??????mL m0 — 样品量，???????????????? g 重点需要注意的部分在菌悬液的制备及震荡过程上，因为固态发酵的的产品大部分为聚集状态不容易分散开来，这点与液态发酵产品不同。所以： 悬液中要加分散剂分散菌团； 震荡时间也要较液态发酵产品时间长，使用旋转式摇床控制在180——200r/min，时间为60min 。