食品理化检验技术（新） HPLC法测定合成着色剂的含量 HPLC法测定合成着色剂的含量（试样溶液的测定）.pptxVIP

HPLC法测定合成着色剂的含量技能点：试样溶液的测定主讲：李冰心 食品营养与检测专业教学资源库 目 录一二试样制备仪器准备三五四仪器参考条件色素提取试样溶液的测定 — — 仪器准备一仪 器规 格仪 器规 格高效液相色谱仪G3垂漏斗电子天平0.001g蒸发皿恒温水浴锅100℃±1℃分液漏斗微孔滤膜0.45μm刻度移液管1mL容量瓶5mL试样制备二色素提取三1.聚酰胺吸附法2.液-液分配法1.聚酰胺吸附法HPLC法测定合成着色剂的含量（1）（2）（3）（4）用60℃pH为4的水洗涤3到5次，用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3到5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3到5次，直至色素完全解吸。收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。样品溶液加柠檬酸溶液调pH到6，加热至60℃，1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中搅拌片刻，以G3垂熔漏斗抽滤。经0.45μm微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。— —2.液-液分配法（适用于含赤藓红的样品）HPLC法测定合成着色剂的含量（1）（2）（3）（4）样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺-正丁醇溶液（5%）10mL~20mL，振摇提取，分取有机相，重复提取，直至有机相无色。合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至10mL，转移至分液漏斗，加10mL正己烷混匀。加氨水溶液提取2到3次，每次5mL，合并氨水溶液层（含水溶性酸性色素），用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经0.45μm微孔滤膜过滤，进高效液相色谱仪分析。— —仪器参考条件四表 1 梯度洗脱表色谱柱：C18柱，4.6mm×250mm，5 μm。进样量：10μL。柱温：35℃。二列管阵列检测器波长范围：400nm~800nm，或紫外检测器检测波长：254nm。梯度洗脱表见表1。时间min流速mL/min0.02mol/L乙酸铵溶液%甲醇%01.095531.06535710010010.11.0955211.0955试样溶液的测定五将样品提取液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。结果计算HPLC法测定合成着色剂的含量式中：X——试样中着色剂的含量，g/kg；c——进样液中着色剂的浓度，μg/mL； V——样液稀释总体积，mL；m——试样质量，g；1000——换算系数。结果保留2位有效数字。 谢谢 谢谢