微生物发酵技术 任务三 青霉素的提取和精制 青霉素的提取精制.pptVIP

单元三 抗生素类药物的发酵生产 项目二 青霉素的发酵生产 任务三 青霉素的提取和精制 青霉素不稳定，遇酸、碱、热分解失活 水溶液中不稳定，非极性溶剂中稳定 易溶于有机溶剂，水中溶解度很小 青霉素盐很稳定；降解产物具有致敏性 在发酵液预处理、提取和精制过程条件温和、快速，防止降解。 分离纯化前了解青霉素的性质 青霉素分离纯化工艺过程 预处理 过滤 萃取 脱色 结晶 青霉素的存在部位：发酵液 浓度较低：仅含百分之几 含有大量杂质：菌丝、未用完的培养基、易污染杂菌、产生菌的代谢产物、色素、金属离子等 目的：浓缩青霉素，去除大部分杂质，改变发酵液的流变学特征，便于后续的分离纯化过程 1.发酵液的过滤和预处理 最好控制在菌丝自溶前放罐。 放罐后要及时冷却，减少青霉素的分解。 青霉素发酵液菌丝较粗大，一般用鼓式过滤机过滤 1.发酵液的过滤和预处理 过 滤 鼓式真空过滤机过滤 一次滤液：pH6.2-7.2 蛋白质含量0.5～2.0mg/ml 板框式过滤机过滤 10%硫酸调节pH4.5-5.0，加入0.07%溴代十五烷吡啶（PPB），0.07%硅藻土为助虑剂 二次滤液：澄清透明，用于提取（收率90％） 发酵液和滤液应冷至10℃以下，贮罐、管道和滤布等应定期用蒸汽消毒。 2.萃取 青霉素与碱金属所生成的盐类在水中溶解度很大， 而青霉素游离酸易溶解于有机溶剂。 溶剂萃取法：将青霉素在酸性溶液中转入有机溶剂中，除去水溶性杂质。然后再转入中性水相中，除去脂溶性杂质。 经过这样反复几次萃取，达到提纯和浓缩的目的。 （1）萃取溶剂的选择 除分配系数外，选择溶剂时尚需考虑下列条件： 在水中溶解度较小 不和青霉素起作用 在5～30℃间的蒸气压较低 回收温度不超过120～140℃ 价格低廉，来源方便等 目前工业生产所采用的溶剂多为醋酸丁酯和醋酸戊酯 分配系数：在一定温度、一定压力下，某一溶质在互不相溶的两种溶剂间分配时，达到平衡后，在两相中的浓度之比为一常数，这个常数称为分配系数。 溶剂 pH=2.5 （溶剂/水） pH=7.0 （溶剂/水） 溶剂 pH=2.5 （溶剂/水） pH=7.0 （溶剂/水） 醋酸戊酯 45/1 1/235 氯仿 39/1 1/220 醋酸丁酯 47/1 1/186 三氯乙烯 21/1 1/260 醋酸乙酯 39/1 1/260 乙醚 12/1 1/190 青霉素的分配系数 （2）萃取方法 先用10%的硫酸将二次滤液pH值调低至2.0～2.2，用醋酸丁酯进行逆流萃取，得一次醋酸丁酯萃取液（BA萃取液）此时青霉素和大部分酸性较弱的有机酸萃取到酯中，而酸性较强的有机盐、无机杂质、碱性化合物等杂质就留在发酵液中。 （2）萃取方法 以1.3%～1.5%NaHCO3在pH6.8～7.1条件下将青霉素从BA萃取液反萃取到水相，大部分有机酸则留在醋酸丁酯相中，只有和青霉素酸性很近的有机酸才和青霉素一起转移。 在第一次丁酯萃取时，由于滤液中有大量蛋白质等表面活性物质存在，易发生乳化，故需加入去乳化剂。通常用PPB，加入量为0.05%～0.1%。 （3）影响青霉素提取的因素 ①pH值：pH值会影响青霉素分配系数和选择性。 青霉素在pH5.0时最稳定。 pH2.0 左右时，青霉素在醋酸丁酯和醋酸戊酯中的溶解度比在水中的溶解度大40倍以上，而pH7.0时，青霉素在水中的溶解度则大186～235倍。 故在萃取时，从滤液萃取到醋酸丁酯时，pH需调至2.0～2.5；从醋酸丁酯反萃取到水中时，将pH值调至6.8～7.1。 反萃取时pH值的调控极为重要，只有在中性时，青霉素以盐的形式存在，转移才较为完全，如果碱性稍强，不但许多有机酸类杂质转移到水中影响青霉素的质量，而且青霉素极易被分解。 为避免pH值波动，反萃取时常用缓冲液。可用磷酸盐缓冲液、碳酸氢钠或碳酸钠溶液等。 反萃液中青霉烯酸含量与萃取和反萃取时pH值有关，反萃液中青霉烯酸含量随萃取时pH值升高而降低，随反萃取时pH值升高而升高。 序号 反萃取pH值 萃取pH值 2.0±0.2 3.0±0.2 4.0±0.2 Gu①（相对单位） 1 6.0 1.30 1.00 0.14 2 7.0 1.63 1.2. 0.35 3 8.0 2.50 1.75 0.43 不同pH值下萃取和反萃取时，反萃取液中青霉烯酸含量 ②浓缩倍数 浓缩倍数对选择性也有很大影响。乙酸丁酯用量越多，萃取越完全，提取率也越高。但某些杂质如色素含量也越高，而且溶剂消耗量提高会大幅度提高生产成本，特别是给浓缩增加工作量。 在生产中，从滤液萃取到醋酸丁酯时，浓缩比一般为1.5～2.5倍。从乙酸丁酯反