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常用术语
1.色谱图
色谱图( chromatogran)包含有色谱流出曲线、色谱峰和基线,如图 1所示。
图1 色谱图
(1)色谱流出曲线,由检测器输出的电信号强度对时间作图所得的曲线。
(2)基线( baseline),在实验条件下,只有流动相(没有样品组分)经过检测器的信号-时间曲线。基线通常是一条水平线,反映仪器(主要是检测器)的噪声随时间的变化。操作条件不稳定或检测器及其附件的工作状态变化,使基线朝一定方向缓慢变化,称为基线漂移( drift);各种偶发因素使基线出现起伏不定,称为噪声( noise)。
(3)色谱峰( chromatographic peak),系指色谱流岀曲线的突起部分。色谱峰有峰高、峰宽、峰面积和拖尾因子等主要参数
2.色谱峰参数
(1)峰高( peak height,h),系指色谱峰顶点与基色谱峰顶点与基线间的垂直距离,是定量分析参数之一。其大小可以用电信号的大小(mV或 mA)或高度(mm)表示。
(2)峰的区域宽度,是描述色谱峰的重要参数之一,是组分在色谱柱中谱带扩张的函数,反映色谱操作条件的动力学因素,可用于量度色谱分离的效率,反映柱效的高低。常用标准偏差、半峰宽和峰底宽三种方法来表示。
标准偏差( standard deviation,a),是正态分布曲是正态分布曲线上两拐点距离的一半。色谱峰是高斯曲线,可用标准偏差σ表示峰的区域宽度,σ的大小表示组分被带出色谱柱的分散程度。σ越大,代表组分越分散,σ越小,组分越集中。对于正常峰,σ为0.607倍峰高处色谱峰宽的一半,如图1中EF 距离的一半。
半峰宽( peak width at half height,W1/2),峰高一半处的峰宽,图1GH间的距离。半峰宽(W1/2)与标准偏差(σ)的关系为
W1/2=2.355σ
峰底宽( peak width,W),简称峰宽,是色谱峰两侧拐点的切线在基线所截得的距离。如图1 中IJ之间的距离。峰宽和标准差、半峰宽之间的关系为
W=1.699W1/2/=4σ
(3)峰面积( peak area,A),系指色谱峰与峰底间包围的面积,是常用的色谱定量参数。色谱峰的面积可由色谱仪中的微机处理器或积分仪求得,也可采用以下方法计算求得
对称色谱峰: A=1.065hW1/2
非对称色谱峰: A=1.065h(W0.15+W0.85)/2
式中,W0.15和 W0.85 分别为 0.15 倍峰高和 0.85 倍峰高处的峰宽。
(4)拖尾因子( tailing factor, T),又称为对称因子,用于衡量色谱峰的对称性。《中国药典》规定对称因子在0.95-1.05的色谱峰为对称峰,小于0.95的为前沿峰;大于1.05的为拖尾峰。
3.保留值
保留值是色谱定性分析的依据,是组分在色谱柱中滞留行为的量度,通常用保留时间和保留体积来描述。
(1)死时间( dead time,tM),分配系数为零的组分,即不被固定相保留的物质进入色谱柱时,从进样开始到色谱图上出现峰极大值所需的时间。
组分不被固定相保留,其迁移速度接近于流动相的迁移速度(u),若色谱柱柱长为L,则有
(2)保留时间( retention time,tk),系指从进样到某组分在柱后出现浓度极大时所需的时间,即从进样开始到某组分色谱峰顶点所需时间。
(3)调整保留时间( adjusted retention time,tR),系指某组分的保留时间扣除死时间后的时间。
(4)死体积,由进样器至检测器的流路中未被固定和占有的空间。一般指色谱柱内固定颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头之间的空间以及检测器空间的总和。
(5)保留体积( retention volume,vR)是指从进样开始到待测组分在柱后出现浓度最大值时所通过的流动相体积。在确定实验条件下,某组分的保留体积是一定值,与流速无关。
(6)调整保留体积( adjusted retention volune,vk)是指扣除死体积后组分的保留体积。
(7)相对保留值( relative retention,r),系指在相同操作条件下,某组分(i)调整保留值(或 VR)与某标准物质(s)的调整保留值(tk或 Vk)的比值。
由于相对保留值只与柱温及流动相、固定相性质有关,而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关,因此 r,在
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