仪器分析技术 高效液相色谱法的特点 HPLC的特点.docVIP

高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）是色谱法的一个重要分支，20世纪60年代末期，在经典液相色谱法基础上，引入气相色谱的理论和实验技术，它以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱中，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对样品的分析。HPLC采用颗粒极细的高效填料以高压匀浆装柱，柱效大大高于经典液相色谱法，且安装好的柱可反复使用；HPLC采用高压泵输送流动相，分析速度快，同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物连续检测，易于实现自动化，且所需试样少，微升数量级的试样足以进行全分析。广泛用于医药、生化、石油、化工、环境卫生和食品等领域，高效液相色谱仪如图1所示。 图1 高效液相色谱仪 高效液相色谱法有以下的特点： (1)高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。 (2)高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比气相色谱的分离和经典液相色谱法的分离效能高出许多倍。 (3)高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。 (4)分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。 (5)应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。 此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。