【临床微生物实验】_2细菌形态学检查、培养和分离技术.pptVIP

* * ②溴麝香草酚蓝在酸碱环境中的颜色变化 酸性 中间过渡 碱性 * * ③酚红 碱性 酸性 * * ④甲基红：酸pH4.4红色 碱pH6.2黄色 ⑤中性红：酸性pH＜6.8红色，碱性黄色 ⑥厌氧指示剂： 亚甲蓝和刃天青 （无氧：都是无色， 有氧：亚甲蓝蓝色，刃天青红色） * * * * 双糖铁(KIA)培养基 斜面观察：乳糖 底层观察：葡萄糖、硫化氢、产气 ⑦指示剂：多用酚红（酸：黄，碱：红） * * （4）选择培养基 （selective medium） 培养基中加入抑制剂，抑制标本中杂菌生长，选择性让目的菌生长。 SS平板 * * 肠道强选择性培养基：SS琼脂 底物：乳糖 指示剂：中性红（酸性红色，碱性淡黄色） 抑制剂：胆盐抑制革兰阳性菌生长；枸橼酸盐和煌绿对大肠埃希菌生长有一定抑制 * * 肠道弱选择性培养基： 麦康凯琼脂 底物：乳糖 指示剂：中性红（酸性红色，碱性淡黄色） 抑制剂：胆盐（抑制革兰阳性菌生长） 大肠埃希菌（红色菌落）和福氏志贺菌（淡黄色菌落）在麦康凯（Mac)平板上 * * （5）特殊培养基 （special medium） 疱肉培养基、 巯基乙醇酸钠培养基 L型培养基 培养基按形状分类（琼脂含量不同） * 液体培养基 半固体培养基 固体培养基 （三）培养基的制备 调配 溶解 校正pH：最适pH一般为7.2-7.6 分装 灭菌：最常用高压灭菌法 质量检验：无菌试验和效果检查 保存 * * 二、细菌的人工培养 （一）无菌技术 概念：防止环境中的微生物污染待检物，同时防止待检物中可能存在的病原微生物污染环境和实验室人员的系列规范化操作技术。 * * * * 1．平板划线分离法 2．斜面固体接种法 3．液体接种法 4．半固体穿刺接种法 5．倾注平板法 6．涂布接种法 掌握上述分离接种方法和目的 （二）细菌的接种与分离方法 * * * * 分区划线培养后结果 临床微生物学检验 Laboratory Science of Clinical Microbiology * * 细菌检验的基本技术（一） 第一节 细菌形态学检查 第二节 细菌的培养和分离技术 * * 微生物检验流程 * * 第一节 细菌的形态学检查 工具：显微镜 显微镜检查的目的： 1.镜检可以了解标本中有无细菌及大致的菌量 2.根据细菌形态、排列和染色性有助于对标本中的病原菌进行初步诊断，对临床早期诊断和治疗疾病有一定的参考意义 方法：包括不染色标本检查法和染色标本检查法 * * 常用的显微镜 （1）普通光学显微镜（light microscope） 光源：自然光或灯光，波长0.4μm 最大分辨率：0.2μm （2）暗视野显微镜（darkfield microscope） （3）相差显微镜（phase contrast microscope） （4）荧光显微镜（fluorescence microscope） （5）电子显微镜（electron microscope） 返回 * * 普通光学显微镜 * * 目的：主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况。 常用的方法：悬滴法和压滴法 有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移。 无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变。 一、不染色标本直接镜检 * * 悬滴法检查细菌的动力 * * * * 不染色标本镜下结果观察： 动力（+），动力（-） 用普通光学显微镜（高倍镜）观察时注意：调小显微镜的光栅 * * 有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定： 如疑似霍乱患者“米泔水样”便中发现穿梭样运动细菌，可辅助诊断。 螺旋体辅助诊断 * * （一）常用染料（色基+助色基） 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等， 电离后带正电荷，常用于细菌染色（原因何在？）。 2．酸性染料：有伊红、刚果红等，电离后带负电荷。 3．复合染料（中性染料）：复合染料有瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等 。 二、染色标本的显微镜检查 * * （二）常用的染色方法：正染色法和负染色法 作用：染色标本的检查，可观察细菌的染色性、 形态、 排列、大小、某些特殊结构等。 染色的基本步骤：涂片、干燥、固定、染色。 背景着色 菌体着色 * * 细菌涂片的制作过程 d 菌悬液直接涂布 * * 正染色法：革兰染色、抗酸染色、荧光染色等 1．革兰染色（gram st