Osa-miR812g调控水稻对稻瘟病菌抗性的研究.pdfVIP

摘要 水稻从生长发育到成熟收获会遭受病原物不同程度的危害，稻瘟病被称为水稻的 ―癌症‖ ，影响到水稻产量和品质。MicroRNAs(miRNAs)是真核生物生长发育和防御不 可或缺的一类长度为21-24nt 非编码sRNA，近年来已经成为研究水稻对稻瘟病抗性 的热点调控因子。前期实验室通过对感病材料丽江新团黑谷（LTH ）和含有单个R 基 因的抗性材料IRBLkm-Ts 接种稻瘟病菌所建立的小RNA 文库进行深度测序，结果表 明，miR812g/h/i/j 在感病材料LTH 中被诱导上调，在抗病材料IRBLkm-Ts 中被诱导 下调，初步判断miR812g/h/i/j 可能参与到水稻对稻瘟病菌的抗性，但是并不清楚其调 控机理，因此我们围绕miRNA812g 及其模拟靶标MIM812 、靶基因OsCIPK10 进行 稻瘟病菌抗性鉴定及其作用机理探究。实验结果和结论如下： 1. miR812g 负调控水稻对稻瘟病菌的抗性 通过对miR812g 过表达和模拟靶标MIM812 转基因株系进行不同方式的稻瘟病 菌接种，划伤接种NC-34 稻瘟病菌、叶鞘注射接种荧光标记的GZ8 稻瘟病菌、喷雾 接种 NC-34 稻瘟病菌，结果分析表明，miR812g 过表达转基因株系相比于野生型 Kasalath 更感稻瘟病，主要表现在病菌侵染进程加快，H O 累积减少，相关防御基因 2 2 下调，而模拟靶标MIM812 转基因株系相比于野生型Kasalath 更抗稻瘟病，主要表现 在病菌侵染进程减慢，H O 累积增多，相关防御基因上调。由此证明，miR812g 负 2 2 调控水稻对稻瘟病菌的抗性。 2. miR812g 负调控水稻PTI 反应 通过对miR812g 过表达和模拟靶标MIM812 转基因株系进行PAMPs 分子chitin 处理，检测PTI 早期防御相关基因的表达。结果分析表明，miR812g 过表达转基因株 系相比于野生型Kasalath 相关防御基因在12 h、24 h 被诱导下调，而模拟靶标MIM812 转基因株系相比于野生型Kasalath 相关防御基因在12 h、24 h 被诱导上调。由此证明， miR812g 负调控水稻PTI 反应。 3. miR812g 影响水稻产量的相关性状 对miR812g 过表达和模拟靶标MIM812 转基因株系田间生长表型观察统计，结 果分析表明miR812g 通过对水稻产量相关性状的影响参与到水稻的生长发育调控。 4. miR812g 在转录后和翻译水平负调控靶基因OsCIPK10 的表达 通过 qRT-PCR 检测发现 miR812g 过表达转基因株系中靶基因 I Os03g22050(OsCIPK10) 的表达水平被抑制表达，进一步又通过荧光报告系统发现靶 基因OsCIPK10 蛋白水平受到miR812g 的抑制，由此证明，miR812g 在转录后和翻译 水平负调控靶基因的表达。 5. OsCIPK10 参与到水稻对稻瘟病菌的抗性 前期实验室通过对感病材料丽江新团黑谷（LTH ）和含有单个R 基因的抗性材料 IRBLkm-Ts 接种稻瘟病菌建立的小 RNA 文库进行深度测序，结果表明，OsCIPK10 在感病材料 LTH 中诱导下调，在单基因系抗病材料中被诱导上调，初步判断， OsCIPK10 可能参与到水稻对稻瘟病菌的抗性。 6. OsCIPK10 正调控水稻对稻瘟病菌的抗性 构建OsCIPK10 过表达和敲除转基因材料，然后划伤接种稻瘟病Zhong10-8-14， 结果分析表明，OsCIPK10 过表达转基因株系相比于野生型 NPB 对稻瘟病菌抗性增 强，而OsCIPK10 敲除转基因株系对稻瘟病菌抗性减弱，因此证明OsCIPK10 正调控 水稻对稻瘟病菌的抗性。 7. OsCIPK10 与RBOHB 存在相互作用 根据靶基因OsCIPK10 的磷酸激酶功能分析，我们深入研究其对稻瘟病菌的