EMS诱变小麦Waxy基因变异及机理分析.pdfVIP

摘 要 本研究利用聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS）法对两个突变体库一共 1200 份 诱变小麦群体的 Waxy 蛋白变异进行了鉴定，并通过双向电泳 （2D）、基因克 隆、原核表达的方法验证SDS结果并解析Waxy 基因变异机制及其对淀粉含量 的影响。主要结果如下： 1. 从小麦EMS 诱变群体中一共鉴定出3 份Wx 蛋白迁移率变化材料，其中2 份 材料M2-97-8，M2-104-2 来自AS201642 突变体库为Wx-B1 突变体；1份材料M2-101-1 来自蜀麦126 突变体库为Wx-A1 突变体。 2. 对三份突变体进行2D检测，发现两份Wx-B1 突变体等电点均发生了 变化，而 M2-101-1 结果中存在 2 个亚基但等电点未发生变化。进一步，利用 UREA-SDS对M2-101-1 再次进行分析，发现Waxy 区域出现了2 条带，证实 Wx-A1 迁移率发生变化，与Wx-D1 重合，并且Wx-A1 表达量有所降低。 3. 对突变体Wx-1 DNA 克隆，M2-97-8 和M2-104-2 中Wx-B1 全长序列为2793bp ， M2-101-1 中 Wx-A1 全长为 2781bp 的序列。序列分析发现，M2-97-8 有两处突变 G2002A 和G2715A ；M2-104-2 一处突变G1860A ，M2-101-1 一处突变C 1448T。cDNA 克隆发现了相同的单碱基突变。氨基酸分析表明：M2-97-8 的两处突变中，第580 处 甘氨酸被精氨酸取代，另一个为无意义突变；M2-104-2 在第422 处谷氨酸被赖氨酸 取代； M2-101-1 在第316 处脯氨酸被亮氨酸取代。 4. 对突变的 Wx-1 基因进行原核表达分析，发现与预测结果相符，与种子中迁移 率变化趋势一致，但表达的蛋白比种子中提取的对应蛋白迁移率更小。 5 ．对突变材料籽粒淀粉组成测定发现M2-97-8 和 M2-104-2 中的总淀粉和直链 淀粉含量比对照（AS201642 ）高，M2-101-1 中的总淀粉和直链淀粉含量比对照（蜀 麦126）低，且均差异显著。在淀粉琼脂糖凝胶电泳中，也存在上述相同的直链淀粉 含量差异。虽然在突变体中存在总淀粉和直链淀粉含量的差异，但无法确定其与突变 体Wx-A1 和Wx-B1 之间的相关性。 关键词：EMS ，电泳迁移率，直链淀粉，Waxy 蛋白 I Abstract We reported the identification of waxy mutants with varied electrophoretic motilities using the method of polyacrylamide gel electrophoresis (SDS) and two-dimensional electrophoresis (2D) from a total of 1200 plants of two EMS populations of common wheat. And further explore the molecular mechanism of varied electrophoretic motilities by gene cloning and prokaryotic expression. The major results were described as follows ： 1. Three EMS mutant wheat lines with varied mobility of Wx were identified. In the mutant lines M2-97-8 and M2-104-2 from AS201642, Wx-B1 has varied mobility, and Wx-A1 in the mutant line M2-101-1 which is from Shumai126 has varied mobility. 2. The resul