酶重点项目工程复习资料.docVIP

?第一章?绪论? 1.何谓酶工程，试述其关键内容和任务。? 酶生产、改性和应用技术过程称为酶工程。? 酶工程关键内容包含：微生物细胞发酵产酶，动植物细胞培养产酶，酶提取和分离纯化，酶分子修饰，酶、细胞、原生质体固定化，酶非水相催化，酶定向进化，酶反应器和酶应用等。? 酶工程关键任务是经过预先设计，经过人工操作取得大家所需酶，并经过多种方法使酶催化特征得以改善，充足发挥其催化功效。?2.酶有哪些显著催化特征？? 酶是生物催化剂，和非酶催化剂相比，含有专一性强、催化效率高和作用条件温和等显著特点。?3.简述影响酶催化作用关键原因。? ???酶催化作用受到底物浓度、酶浓度、温度、pH、激活剂浓度、抑制剂浓度等很多原因影响。?5.简述酶活力单位概念和酶活力测定方法。? ???酶活力单位：在特定条件下（温度可采取25℃，pH等条件均采取最适条件），每1min催化1μmol底物转化为产物酶量定义为1个酶活力单位，这个单位称为国际单位（IU）。在特定条件下，每秒催化1mol底物转化为产物酶量定义为1卡特（kat）? ???酶活力测定方法：振荡测定法，酶柱测定法，连续测定法，固定化酶比活力测定，酶结合效率和酶活力回收率测定，相对酶活力测定。或测定方法：化学测定法、光学测定法、气体测定法?其它.? 酶发展历史：4000多年前夏禹时代——酿酒技术。3000多年前周朝——制造饴糖、食酱等食品。1833年——佩恩和帕索兹从麦芽水抽提物中得到淀粉酶。19世纪中叶——巴斯德对酵母乙醇发酵进行研究。19——米彻利斯和曼吞依据中间产物学说，推导出米氏方程。1926年——萨姆纳得到脲酶结晶，并证实它含有蛋白质性质。1960年——雅各和莫诺德提出操纵子学说。1982年——切克发觉核酸类酶。1983年——阿尔特曼发觉核糖核酸酶PRNA部分M1RNA含有核糖核酸酶P催化活性。? 酶专一性分为绝对专一性和相对专一性。相对专一性又可分为键专一性和基团专一性?米氏方程：? 酶可逆性抑制作用能够分为竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制。????????????????????????Km??增大????????不变?????????减小????????????????????????Vm??不变????????减小?????????减小?酶生产方法：提取分离法，生物合成法，化学合成法 第二章? 经过预先设计，经过人工操作?，利用微生物生命活动取得所需要酶技术过程，称为酶发酵生产。?酶发酵生产是当今产酶关键方法，因为微生物含有种类多、繁殖快、易培养、代谢能力强等特点。?1.?试述酶生物合成基础过程。? a．?RNA生物合成——转录：转录起始、RNA链延伸、转录终止、RNA前体加工成为成熟 RNA分子。? b．?蛋白质生物合成——翻译：氨基酸活化生成氨酰-tRNA、肽链合成起始、肽链延伸、肽链合 成终止、蛋白质前体加工修饰成含有特定空间结构功效蛋白。? 2.?何谓酶生物合成诱导作用？是简述其原理。? 加入一些物质使酶生物合成开始或加速进行现象，称为酶生物合成诱导作用。? 原理：当无诱导物存在时，调整基因产生阻遏蛋白和操纵基因结合，覆盖RNA聚合酶结合部位，RNA聚合酶无法和开启基因结合，结构基因无法转录，酶合成受受阻。当诱导物存在时，其和阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白构象发生改变而降低和操纵基因结合能力，RNA聚合酶和开启基因结合，结构基因正常转录，对应酶得以表示。? 3.?什么是酶生物合成反馈阻遏作用？试简述其原理。 酶生物合成反馈阻遏作用指酶催化反应产物或代谢路径末端产物使酶生物合成受到阻遏。?原理：无阻遏物存在时，调整基因产物阻遏蛋白无法和操纵基因结合，结构基因正常转录，对应酶得以正常表示。当阻遏物存在时，其和阻遏蛋白结合使之空间构象发生改变，阻遏蛋白和操纵基因结合，抑制RNA聚合酶和开启基因结合，下游结构基因转录受阻，酶无法正常表示。 4. 简述分解代谢阻遏作用原理及解除方法。 分解代谢阻遏之所产生，是因为细胞内一些物质经分解代谢产生ATP，ATP则是由ADP和AMP经磷酸化转变而来，ATP合成，即意味着胞内ADP、AMP浓度下降，cAMP经过水解作用以补充胞内AMP浓度，故胞内cAMP浓度下降。同时腺苷酸环化酶活性降低，cAMP合成受阻，致使胞内cAMP浓度深入降低。故而cAMP-CAP复合物浓度随之降低，开启基因特定部位无足够cAMP-CAP复合物和之结合从而抑制了RNA聚合酶和开启基因结合，结构基因无法表示，酶合成受阻。 解除方法：在培养环境中控制某种易降解物质量，或在必需时添加适量cAMP。 5. 酶生物合成有哪多个模式？ 同时合成型、延续合成型、中期合成型、滞后合成型。 6、怎样控制微生物发酵产酶工艺条件？ a．保藏菌种用于生产之前要经过细胞活化使细胞生命