第二十章节经典液相色谱法.ppt

第五节 聚酰胺色谱法 (3) 芳香核、共轭双键越多，吸附力越大。  (4) 分子内氢键的形成使化合物吸附力减小。 (二)双重层析 聚酰胺分子中既有亲水基团又有亲脂基团，当用极 性溶剂(如含水溶剂)作流动相时，聚酰胺中的烷基作为 非极性固定相，其色谱行为类似于反相分配色谱，因黄 酮类苷的极性大于苷元，所以黄酮苷比苷元容易洗脱； 当用非极性流动相(如氯仿-甲醇)时，聚酰胺则作为极性 固定相，其色谱行为类似于正相分配色谱。黄酮苷元的 极性小于黄酮苷，因而黄酮苷易被洗脱。此即是聚酰胺 色谱的双重层析。 双重层析只适用于难与聚酰胺形成氢键或形成氢键 能力弱的化合物 。 第五节 聚酰胺色谱法 (二)柱色谱 1. 装柱 将聚酰胺颗粒研磨成小于100目的细粉，并预先 将聚酰胺粉混悬于溶剂(常用水)中湿法装柱。 2.加样 聚酰胺的样品容量较大。每100mL聚酰胺粉可 上样1.5g～2.5g。若利用聚酰胺除去鞣质，样品上柱量 可大大增加。 3. 洗脱 聚酰胺色谱的洗脱剂常用水、由稀至浓的乙醇 液(10%、30%、50%、70%、95%)，或氯仿、氯仿-甲 醇(19︰1 、10︰1、 5︰1、 2︰1、 1︰1)，依次洗脱。 第二节 分配色谱法 六、应用 吸附色谱主要适用于亲脂性物质的分离，对于 强极性物质，如脂肪酸和多元醇等，在极性吸附剂 上分离很不理想，分配色谱的产生，使这些强极性 亲水性物质得到了很好的分离。  分配色谱法的优点在于有较好的重现性，并可 根据K值预示分离结果。 第三节 离子交换色谱法  概念：以离子交换剂为固定相，用水或与水混合的溶剂作为流动相，利用它在水溶液中能与溶液中离子进行交换的性质，根据离子交换剂对各组分离子亲合力的不同而使其分离的方法。 离子交换剂可分为无机离子交换剂和有机离子交换剂，其中以有机离子交换剂在分离分析中应用最广泛，种类也较多，目前国内生产和应用最多的是离子交换树脂 。 第三节 离子交换色谱法  一、离子交换树脂及其特性 (一)离子交换树脂 离子交换树脂主要由高分子聚合物的骨架和活 性基因所组成，它的骨架具有特殊的网状结构。 以聚苯乙烯型比较普遍，化学性质稳定，交换 容量大。 根据树脂所含活性基团的性质，以及所交换离 子的电荷可分为阳离子交换树脂和阴离子交换树脂。 1. 阳离子交换树脂 以阳离子作为交换离子的树脂，其中可电离的 H+离子与溶液中某些阳离子进行交换。 苯乙烯树脂是由苯乙烯和二乙烯苯经聚合，磺 化而成，是最常用的阳离子交换树脂。 第三节 离子交换色谱法  2. 阴离子交换树脂 树脂的母体和苯乙烯型树脂相同，但在母体上连接 －NH2，－NHR，－NR2，或－N+R3X-等活性基团。 此类树脂在水溶液中形成羟基型，商品一般为氯型 强碱性阴离子交换树脂在酸、碱和有机溶剂中较稳 定，可在酸性、碱性和中性溶液中进行阴离子交换。 弱碱性阴离子交换树脂对HO-离子的亲合力大，故只 能在酸性介质中与阴离子交换。 第三节 离子交换色谱法  (二)离子交换树脂的特性 1．交联度 表示离子交换树脂中交联剂的含量，通常以重量百 分比来表示。即在合成树脂时，二乙烯苯在原料中所占 总重量的百分比。 例如，上海树脂厂生产的聚苯乙烯型强酸性阳离子 交换树脂，产品牌号为732(强酸1×7)，其中1×7表示 交联度为7%。  第三节 离子交换色谱法  2．交换容量 是指每克干树脂中真正参加交换反应的基团 数。常用单位为mmol/g，也有用mmol/mL表示的， 即每1毫升干树脂中真正参加交换反应的基团数。 对于离子交换色谱而言，交换容量是一个重要 的实验参数，它表示离子交换树脂进行离子交换的 能力大小。 第三节 离子交换色谱法  3．溶胀 树脂存在着大量的极性基团，具有很强的吸湿 性。因此，当将树脂浸入水中后，有大量水进入树 脂内部，引起树脂膨胀，此现象称为溶胀。 溶胀的程度取决于交联度的高低，交联度高， 溶胀小；反之，溶胀大。 4．粒度 离子交换树脂的颗粒大小，一般是以溶胀状态 所能通过的筛孔来表示。 第三节 离子交换色谱法  二、离子交换平衡和分离机理 (一)离子交换平衡 离子交换反应可用下式表示： 树脂的离子交换反应是可逆的，完全符合化学 计量原则和质量作用定律。当达到平衡时，其