保健食品中芦荟苷的测定.pdfVIP

三、保健食品中芦荟苷的测定 1 范围 本方法规定了保健食品中芦荟苷含量的高效液相色谱测定方法。 本方法适用于以芦荟及其加工品为主要原料的保健食品中芦荟苷含量的测定。 2 原理 样品用甲醇+水（55+45 ）作为溶剂，提取试样中的芦荟苷，经 C18 柱分离，在 293nm 波长处检测，以芦荟苷保留时间定性，峰面积外标法定量。 3 试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇（CH OH ）：色谱纯。 3 3.1.2 石油醚：沸程30℃～60℃。 3.2 标准品 芦荟苷标准样品的分子式、相对分子量、CAS 登录号见表 1，纯度≥90% ，或经国家认 证并授予标准物质证书的标准物质。 表1 芦荟苷标准样品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 芦荟苷 Aloin 1415-73-2 C21H22O9 418.39 3.3 标准溶液配制 3.3.1 芦荟苷标准储备液：称取芦荟苷标准样品（3.2 ）10mg （精确至 0.01mg ）于25mL 容 量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，摇匀，此溶液浓度为0.4mg/mL 。临用新配。 3.3.2 芦荟苷标准系列工作液：分别准确吸取芦荟苷标准储备液（3.3.1 ）0.5mL 、1.0mL、2.0mL 、 4.0mL 、6.0mL 至 10mL 容量瓶中，用流动相定容，得浓度为 0.02mg/mL 、0.04mg/mL 、 0.08mg/mL 、0.16mg/mL 、0.24mg/mL 的标准系列工作液。 3.4 微孔滤膜：0.45µm ，有机相。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.2 超声波清洗器。 4.3 分析天平：感量分别为0.01mg 和0.001g 。 4.4 离心机：转速≥3000r/min 。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 固体试样 称取已粉碎混合均匀的待测试样适量（约含芦荟苷4mg ，精确到0.001g ），置具塞锥形 瓶中，加入50.0mL 流动相（5.2.2 ），称重，超声处理20min ，放冷，用流动相补足减失的 重量，摇匀，经微孔滤膜（3.4 ）过滤，滤液待测。必要时可进行适当稀释。 5.1.2 含油基质试样 15 称取已粉碎混合均匀的待测试样适量（约含芦荟苷4mg ，精确到0.001g ），置具塞锥形 瓶中，加入25.0mL 石油醚（3.1.2 ），涡旋使充分混匀，过滤，弃去石油醚液，再用少量石 油醚洗涤锥形瓶及滤纸，挥干，将滤纸和残渣置于原具塞锥形瓶中，加入 50.0mL 流动相 （ 5.2.2 ），称重，超声处理20min ，放冷，用流动相补足减失的重量，摇匀，经微孔滤膜（3.4 ） 过滤，滤液待测。必要时可进行适当稀释。 5.1.3 水性液体试样 吸取待测试样，必要时以流动相（5.2.2 ）适当稀释，离心，取上清液经微孔滤膜（3.4 ） 过滤。 5.2 仪器参考条件 5.2.1 色谱柱：C18 柱， 250mm×4.6mm ，5μm，或性能相当者。 5.2.2 流动相：甲醇（3.1.1 ）+水，（55+45 ，v/v ）。 5.2.3 流速：1.0mL/min。 5.2.4 柱温：40 ℃。 5.2.5 检测波长：293nm 。 5.2.6 进样量：10μL。 5.3 标准曲线的制作 将标准系列工作液（3.3.2 ）分别按液相色谱参考条件（5.2 ）进行测定，得到相应的芦 荟苷标准溶液的色谱峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线。 5.4 试样溶液的测定 将试样溶液（5.1 ）按液相色谱参考条件（5.2 ）进行测定，得到相应的样品溶液芦荟苷 的色谱峰面积，根据标准曲线得到待测液中芦荟苷的浓度，平行测定次数不少于两次。 芦荟苷的标准液相色谱图参见附录A 的图A.1 。 6 结果计算 试样