发酵当归补血汤对肉鸡生长性能和肠道微生物菌群多样性的影响研究.pdfVIP

摘 要 当归补血汤(DBT)是中医药经典方剂之一，具有一定的补气补血和免疫增强等功效。但DBT 在兽医临床应用较少，且效果不明确，尤其对DBT 中药发酵产物作为饲料添加剂研究尚处空白。 本论文拟开展枯草芽孢杆菌(B. subtilis)发酵 DBT 的工艺研究，利用高效液相色谱(HPLC)法测定 DBT 发酵前、后相关活性成分含量变化，明确DBT 发酵产物对肉鸡生长、免疫、抗氧化性能和 小肠绒毛形态的影响，以及对SD 大鼠肠道菌群多样性的调控作用，旨在为DBT 发酵产物作为新 型饲料添加剂提供理论依据。 1. B. subtilis 发酵DBT 的工艺参数优化。采用单因素和Box-Behnken 中心组合试验考察了发 酵培养基组分、菌液接种量和发酵时间对多糖提取率的影响。最终确定最佳发酵工艺条件为葡萄 糖添加量0.95% ，蛋白胨添加量1.52% ，接种量2.92%，发酵时间35.8 h。该条件下多糖提取率达 到9.23±0.067% ，高于未发酵组(4.6±0.057%) 。 2. HPLC 法测定DBT 发酵前、后相关活性成分的含量变化。采用HPLC-DAD 法测定阿魏酸 和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，使用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱，柱温为30℃， 流动相A: 0.2% 甲酸溶液，流动相B: 乙腈，梯度洗脱: 0~ 10 min ，82%A; 10~20 min ，82~90%A ， 流速为0.8 mL/min; 进样量为 10 μL;发现与未发酵DBT 相比，DBT 发酵提取物中阿魏酸含量和 毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量分别显著增加了43.94±0.92%和14.10±2.38% (P0.01) 。 3. DBT 发酵产物对肉鸡生长、免疫、抗氧化性能和小肠绒毛形态的影响。试验选用1 日龄健 康、体重相近的白羽肉鸡210 只，随机分成5 组：饲喂基础日粮的对照组、日粮中添加1.0%DBT 药粉的未发酵组、日粮中分别添加0.5%、1.0%和2.0%DBT 发酵产物的发酵组。发现与对照组和 未发酵组相比，1.0% 的 DBT 发酵产物可显著降低肉鸡日采食量(ADFI)(P0.05) 和料肉比 (FCR)(P0.05) ，提高肉鸡平均日增重(ADG)(P0.05) 。同时，法氏囊指数、新城疫抗体效价以及血 清中IL-2、IL-6、TNF-α、INF-γ 、SOD、GSH-Px 和T-AOC 含量都显著升高(P0.05) 。此外，1.0% 发酵组的绒毛高度/ 隐窝深度比值显著高于对照组和未发酵组(P0.05) 。 4. DBT 发酵产物对SD 大鼠肠道菌群多样性的调控作用研究。将SD 大鼠随机分成4 组：对 照组、B. subtilis 组、未发酵组和发酵组，每组6 只。采用高通量测序技术对粪便微生物16S rRNA 进行分析。发现四个组共识别出 3483 个操作分类单元(OTUs), 其中各组共有 1236 个 OTUs, 最 丰富的门是拟杆菌门(Bacteroidetes)(29.65~38.19%)和厚壁菌门(Firmicutes)(48.30~67.04%) ，且与其 他实验组相比，DBT 发酵产物能显著上调植物乳杆菌(Lactobacillus) 的丰度，下调另枝菌属 (Alistipes)和副拟杆菌属(Parabacteroides)等病原菌的丰度。 综上研究，利用B. subtilis 发酵DBT 可以显著提高多糖、阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含 量，日粮中添加1.0%的DBT 发酵产物能够显著改善肉鸡的生长性能，并可积极改善大鼠的肠道 菌群结构关系，促进肠道有益菌生长，并抑制致病菌的繁殖，为 DBT 发酵产物作为新型饲料添 加剂提供了理论依据和技术支撑。 关键词：当归补血汤, 发酵工艺, 生长性能, 菌群多样性, 饲料添加剂 I Abstract Danggui Buxue Tang (DBT) is one of the classic prescriptions of traditional Chinese medicine, it has been found to have certain effects suc