MERTK促进猪瘟病毒复制的分子机制.pdfVIP

摘 要 病毒不能在细胞外繁殖，只有入侵到宿主细胞后才能复制并产生子代病毒粒子。病毒入侵宿 主细胞时需要宿主细胞膜上受体蛋白的参与，同时，这些受体蛋白也决定了不同病毒的宿主范围 及组织嗜性。因此，鉴定病毒的细胞受体，明确病毒的入侵机制，可为设计新型抗病毒药物提供 靶标，为疫苗研发提供新的思路，对病毒的防控和治疗具有重要意义。 猪瘟是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）引起的一种急性、烈性传染病，在多 个国家流行，给世界养猪业造成了严重的经济损失。目前，在CSFV 入侵方面的研究，仅发现了 硫酸乙酰肝素酶（Heparan sulfate, HS）和层粘连蛋白（Laminin receptor, LamR ）两个吸附受体， 且这两个吸附受体都与CSFV 的Erns 蛋白存在相互作用。然而，E 1 和E2 蛋白足以介导CSFV 的 入侵，证明Erns 蛋白对CSFV 的入侵不是必需的。同时，还有研究表明，E2 蛋白可能和某种细胞 膜蛋白相互作用进而促进CSFV 的入侵，但具体是哪种细胞膜蛋白尚不清楚。 为了寻找影响 CSFV 入侵的细胞膜蛋白，我们分析了两组CSFV 感染猪体后的转录组数据， 并从中筛选出了12 个候选膜蛋白，结合表达海肾荧光素酶报告基因的重组病毒rCSFV-Rluc，通 过siRNA 下调试验发现，下调MERTK 、TYRO3 、CD97 和CD69 这四个蛋白后可显著地抑制CSFV 报告基因的表达，随后我们选取抑制效果最明显的MERTK 进行了深入研究。结果显示，在PK- 15 细胞中过表达 MERTK 后可以促进 CSFV 的感染；抗 MERTK 的多克隆抗体和可溶性的 MERTKED-His 蛋白均可呈剂量依赖性的阻断CSFV 的感染；同时，抗MERTK 的多克隆抗体也可 呈剂量依赖性的抑制基因2 型CSFV 的感染；随后通过免疫共沉淀和表面等离子共振试验结果发 现，MERTK 和 CSFV 的E2 蛋白之间存在相互作用；病毒入侵试验结果发现，MERTK 可促进 CSFV 对PK- 15 细胞的入侵；另外，我们发现，MERTK 胞质尾区酪氨酸激酶的抑制剂LDC1267 也可呈剂量依赖性的抑制CSFV 的感染。在LDC1267 或siMERTK 处理后的PK- 15 细胞中，CSFV 感染后与对照组相比，发现I 型干扰素mRNA 的转录水平均有显著上升，证明CSFV 通过MERTK 的激酶活性抑制了宿主细胞的固有免疫；而LDC1267 处理对CSFV 的入侵没有影响，证明MERTK 的酪氨酸激酶活性不影响CSFV 的入侵过程；值得一提的是，可溶性的MERTKED-His 蛋白也可 以阻断牛病毒性腹泻病毒的感染。 综上所述，CSFV 可通过E2 蛋白与MERTK 直接相互作用以促进其对PK- 15 细胞的入侵， 同时 CSFV 也通过 MERTK 的激酶活性抑制宿主细胞的固有免疫来促进其本身的复制。另外， MERTK 在基因2 型CSFV 和牛病毒性腹泻病毒的感染过程中也发挥着重要作用。 关键词：猪瘟病毒，MERTK ，入侵，固有免疫 I Abstract Viruses replicate within cells, and only after they enter host cells can they replicate and produce progeny virions. The virus entry into host cells requires the participation of receptors on host cell membrane, and these receptor proteins also determine the host range and tissue affinity of different viruses. Therefore, it is of great significance to search for the cellular receptor of virus and identify the