m~6A在猪胚胎期和出生后骨骼肌发育过程中的调控作用研究.pdfVIP

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2020-11-02 发布于江西
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m~6A在猪胚胎期和出生后骨骼肌发育过程中的调控作用研究.pdf

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摘要 6 N6-methyladenosine (m A) 是真核生物mRNA 上最常见和重要的一种转录后表观遗传修饰形 6 式，主要分布于基因内部CDS 和3 ’UTR 区域。近些年的研究揭示，m A 可通过识别蛋白的结合调控RNA 命运，包括RNA 稳定性、RNA 出核、前体RNA 可变剪接和mRNA 翻译等方面， 6 从而参与调控广泛的生物学过程。m A 在调控包括脂肪和大脑皮质等组织发育中的作用机制已被揭示，然而在骨骼肌发育中的调控作用还不清楚。因此，本论文的研究内容主要包括以下几个方面： 6 高起始量RNA 的需求是限制m A 功能研究的主要障碍，尤其在组织发育早期。本研究将单 6 细胞中常用技术SMART2 与免疫沉淀方法MeRIP-seq 结合，使5 μg 总RNA 绘制全转录组m A 6 图谱得以实现，为微量样本的全转录组m A 鉴定提供了重要方法。敲低成肌细胞METTL14 基因表达，抑制细胞分化并促进细胞细胞增殖。识别蛋白IGF2BP1 结合骨骼肌分化调控基因，并参与调控成肌细胞分化和增殖。 6 6 6 依托微量m A 检测方法，我们首次展开了m A 在猪胚胎期骨骼肌发育中调控作用研究。m A 6 6 鉴定结果显示猪胚胎期骨骼肌发育中 m A 高度动态变化。m A 变化与基因表达差异强相关。此 6 外，我们发现m A 识别蛋白IGF2BP1 在猪胚胎期骨骼肌发育中基因表达持续下降，通过siRNA 6 介导的基因沉默抑制 IGF2BP1 基因表达验证了 IGF2BP1 对成肌细胞分化的调控作用。m A 和 6 IGF2BP1 蛋白RIP-seq 联合分析结果显示猪胚胎期骨骼肌中228 1 个基因由m A 和IGF2BP1 共同 6 调控，其中包括骨骼肌发育调控关键基因MyoG 和骨骼肌标志基因MYH2 。由此可知m A 在猪胚胎期骨骼肌发育中具有重要调控作用，与识别蛋白 IGF2BP1 共同调控猪胚胎期骨骼肌发育中关键基因代谢。 6 出生后猪骨骼肌发育进入肌纤维转化和成熟阶段，m A 保持动态变化。肌纤维转化调控基因 6 6 CAMK2A 和MYOZ1 在出生后骨骼肌发育中存在持续显著m A 变化。其中CAMK2A m A 水平持