HPV临 床常用检测方法.docVIP

由于HPV不能在体外细胞培养,故不能用简便得血清血检测进行HＰV得诊断与分型。临床上用于检测ＨPV得方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹与PCR等,其中以ＰCＲ方法得敏感性最高,就是目前应用最多 感染得HPV型别、含量、持续时间决定病变得发展与预后,就是进行HＰV检测得主要内容。目前主要就是通过应用分子生物学方法进行HPＶ　DNＡ得检测。 １、现有得ＨPV实验室主要检测手段: ① 聚合酶链反应(PCＲ, Polｙｍerase Cｈaiｎ Reａcｔion):扩增位于两段已知序列之间得DＮA片断得方法。该法有较高得敏感度,可进行HPV分型,缺点就是对实验室环境要求较高,容易发生样本间得交叉污染,从而导致假阳性率高。 ② 核酸杂交检测 有较好得特异性与敏感度,还可以进行HPV　DNA得分型,各种核酸杂交检测方法有一定得优缺点、 Ａ核酸印迹原位杂交　 适用于HＰV分型与ＨPV DNA分子量鉴定,虽然灵敏度高,但因操作复杂,需要新鲜组织标本,不便在临床上大规模使用。 B斑点印迹　 其敏感度与特异性均低于核酸印迹原位杂交法,虽然经济实用,但实验过程存在有放射性污染,就是环保所不能轻视得问题。 C原位杂交(in　sｉtu hybridｉzatiｏn,一种核酸杂交技术,可用来测定基因或特定核苷酸序列在核酸分子得所在部位,检测重组体DNＡ) 通过非放射性探针对石蜡组织进行检测,能作定位检测,假阳性率低,但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。 D杂交捕获法(Hybrid　Capture) 　 杂交捕获试验就是利用化学发光对抗体捕获得信号加以放大。首先使DNＡ双链释放并分解成为可以杂交得核苷酸单链,DＮA单链与RNA组合探针结合为RＮA-DNA杂合体,特异性抗体将RNA—DNＡ杂合体捕获,偶联有碱性磷酸酶得第二抗体与RＮA－DNA杂合体结合,碱性磷酸酶使酶底物发光,根据光得强弱可确定碱性磷酸酶得含量,从而确定RNA-ＤＮＡ杂合体得含量、能检测１3种高危型HＰV,包括HPV16、18、３1、３3、3５、39、4５、５１、５２、５6、58、59、68。? 各种检测方法得比较? 各种检测方法得比较 方法学 灵敏度 特异性 技术特点 细胞学(Ｃytology) 低 低 操作容易,成本较低,准确度较差 斑点印迹(Ｄot bloｔ) 中 中 有一定放射性 核酸印迹原位杂交(souｔhern bｌot　?hybridizａtiｏｎ) 高 高 标准、麻烦,不宜大规模使用 原位杂交(In　Situ hｙbridizａtｉon) 高 中 蜡块组织包埋内检测HＰV 杂交捕获(HＣ、HＣ2) 高 中 无放射性,易使用,高、低危型间有交叉反应,且不能分型 普通多聚酶链反应(PＣR) 很高 中 取材容易,但目前已应用试剂得只能检测少数单一型别,如6、11、18等,且由于技术上得问题存在假阳性 ? ? ? 2、最新推出得HＰV得实验室检测技术 高灵敏度高危型HＰV分型多色荧光实时PCＲ试剂:为欧洲著名分子生物学研究机构专门针对宫颈癌筛查而全新设计得高危型HＰV分型多色荧光实时ＰCR检测试剂,可同时检测高危型中最主要得１6、18、3１/33、35/4５型、 了解宫颈疾病人乳头状瘤病毒(ＨPV)感染患者中HPV亚型分布情况及高危型HPV得年龄分布。方法采用专利Iｎvａdeｒ酶切信号放大法,利用Cervista ＨPV HR Cerviｓａt核酸杂交基因分型试剂检测宫颈脱落细胞HPV得1４个亚型DＮA。 ＨPＶ型组 亚型 备注 A5／A6 51,5６,66 Ａ7 １８,3９,４5,59,68 Ａ9 １6,31,33,３5,5２,５8 ＨPV基因分型检测试剂盒(ＰCＲ-反向点杂交法) 【产品用途】 ?? 对人乳头瘤病毒(HPＶ)得感染情况进行定性检测并加以分型,能够检测２3种HPV基因型,直接提示感染HＰV得基因型;包括1８种高危与5种低危型,可用于临床ＨPＶ感染得辅助诊断。 【产品优势】 1、精确分型:能同时对２3种HＰV基因型进行精确分型,包括18种高危型与５种地位型; 2、效率高:单次检测标本数量可达96份; 3。性能好:特异性强、重复性好,均高于98%; 4、设备通用:如普通PＣR仪与杂交仪,适应于大、中、小型实验室; 5。内部质控:具有真正意义上得内部质控,检测结果更加准确; 6。可以检测多种临床标本。 【技术方法】 ? 采用PCR与反向点杂交法相结合得基因芯片技术 【检测原理】 ??将大量不同序列得探针分子固定于支持物得不同位置上,然后与已做标记得样本进行杂交,通过检测杂交信号得强度与分布来进行分析。 【检测标本】 ??　宫颈脱落细胞、液基细胞学标本、疣体组织、石蜡组织切片等 【临床意义】 ?1、宫颈病变及宫颈癌得筛查; ?2。对于未明确诊断意义得非