生化分离关键技术主要内容.docVIP

生化分离技术：描述回收生物产品分离过程原理和方法术语，是指从动植物组织培养液或微生物发酵液中分离、纯化生物产品过程中所采取方法和手段总称。 生化分离过程是生物技术转化为生产力不可缺乏关键步骤，其技术进步程度对生物技术发展有着举足轻重作用，为突出其在生物技术领域中地位和作用，常称它为生物技术 下游工程。 分离纯化过程难点：目标产物在细胞或反应液中含量不高，杂质种类多，数量大；杂质性质和产物相同；产物稳定性不高。 生化分离技术关键种类：沉淀分离（盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性沉淀、非离子聚合物沉淀）；膜分离（透析、微滤、超滤、纳滤、反渗透）；层析分离（吸附、凝胶、离子交换、疏水、反相、亲和层析）；电泳分离（SDS、等电聚焦、双向电泳、毛细管电泳）；离心分离（低速、高速、超速离心分离技术）， 生化分离特点：成份复杂；含量甚微；易变性/易被破坏；具经验性；均一性相对性。 预处理需注意条件：⑴ 温度尽可能低⑵ 提取液量要确保“充足浸入”⑶ 加入足量酚类吸附剂⑷ 加入足量氧化酶抑制剂⑸ 搅拌转速要合适⑹ pH控制在适宜范围，通常5.5～7 细胞破碎：用一定方法（机械/物理/化学/酶法）打开细胞壁或膜，使细胞内含物有效释放出来。 挤压：微生物细胞在高压下经过一个狭窄孔道高速冲出，因忽然减压而引发一个空穴效应，使细胞破碎。 沉淀：溶液中溶质由液相变成固相析出过程。本质：经过改变条件使胶粒发生聚结，降低其在液相中溶解度，增加固相中分配率。作用：分离、澄清、浓缩、保留 盐溶：低浓度中性盐离子对蛋白质分子表面极性基团及水活度影响，增加蛋白质和溶剂相互作用力，使其溶解度增大。 盐析：中性盐浓度增至一定时，水分子定向排列，活度大大降低，蛋白质表面电荷被中和，水膜被破坏，从而聚集沉淀。 有机溶剂沉淀法 ：使溶液介电常数大大降低，从而增加带电粒子本身之间作用力，易聚集沉淀；争夺酶、蛋白质等物质表面水分子，破坏水化层，使分子易碰聚产生沉淀。 沉淀条件讨论：1. 温度；2. pH ；3. 浓度；4. 离子强度；5. 有机溶剂选择；6. 多价阳离子影响；7. 溶剂用量 膜分离或膜过滤定义：用天然或人工合成高分子薄膜，以外界能量或化学位差为推进力，对两个或两个以上组分溶质和溶剂进行分离、提纯和富集方法。 膜：两相之间一个不连续区间，是隔开两种流体一个薄阻挡层。 膜分离特点：过程为常温过程；不发生相变；密闭系统中进行；产品不受污染；选择性好；适应性强；实现自动化操作。 按膜断面物理形态：表面活性层（ 0.1~1μm，分离作用，其孔径和性质决定膜分离特征，厚度决定传质速度）；多孔支撑层（100~200μm，机械支撑作用，对分离特征和传质速度影响很小） 表征膜性能参数：孔性质；水通量；耐压能力；pH适用范围；对热和溶剂稳定性；截留分子量分布 膜劣化：膜本身不可逆转质量改变（化学性：水解、氧化；物理性：固结、干燥；生物性：微生物代谢产物）。 污染膜是否清洗判据：进出口压力降；透水量或透水质量；定时清洗。 污染膜常见清洗方法 ：机械方法；加起溶解作用物质；加起氧化作用物质；加起渗透作用物质；切断离子结合作用。 浓差极化：指外源压力迫使分子量较小溶质经过薄膜，而大分子被截留于膜表面，并逐步形成浓度梯度现象。 克服极化关键方法：震动、搅拌、错流、切流。 膜分离原理：利用溶液中溶质分子大小、形状、性质差异，对于多种薄膜表现出不一样可透性而达分离目标。分子透过膜可由简单扩散作用引发或外加流体静压差或电场作用所推进。 透析Dialysis（DS）：除去或更换小分子物质；脱盐；改变溶剂成份 透析膜特点：亲水性，分子筛状多孔薄膜；化学惰性；一定机械强度和良好再生性能。 提升透析效果方法：搅拌；定时或连续更换新鲜溶剂。 反渗透RO原理（毛细孔流动模型）：膜组成中含有亲水活性基团，膜表面能选择性吸附水分子而排斥溶质分子，靠近膜表面浓度梯度急剧下降，从而在膜和溶液界面形成一层被膜吸附纯水层(厚度约2个水分子)，在反渗透压力推进下，纯水层水经过膜毛细孔连续不停地渗出。 溶解－扩散模型：把半透膜看成完全致密中性界面，水和溶质经过膜分为两个阶段：第一阶段：水和溶质被吸附溶解到膜材质表面；第二阶段：水和溶质在膜中扩散传输而经过膜。 孔隙开闭学说：膜里无固定连续孔道，所谓渗透性指因聚合物链常常振动而在不一样时间和空间内渗透平均值而已。 氢键理论：水分子进入醋酸纤维膜非结晶部分后，因和羧基氧形成氢键而组成结合水，结合水结合强度取决于膜内孔径，孔径越小结合越牢；牢靠结合水把孔占满，不和醋酸纤维膜氢键结合溶质就不能扩散透过，但能和膜氢键结合离子和分子(水，酸)却能穿过结合水层而有序扩散经过膜。 临界孔径：膜表面孔径为吸附水层厚度2倍时，能获最大分离效果和最高渗透通量。 超滤 Ultraf