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e—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定 一、实验目的 1、学习从天然产物中提取有机化合物的方法。 2、学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理， 点样，展开和计算 Rf 值的方 法。 二．仪器和试剂 仪器三角瓶（50ml）、分液漏斗（15Oml）、蒸馏瓶（50ml）、普通蒸馏装置（或 减压蒸馏装置）、漏斗、色谱柱、硅胶薄层板、量筒、烧杯、层析缸。试剂胡萝 卜、丙酮、石油醚（bp30~60C）硅胶（层析用，200~300目）、无水硫酸钠、 石油醚（bp60~90C）丙酮：石油醚（1: 9） （V/V ）。 三．实验方案 1 、含类胡萝卜素石油醚溶液的制备 将新鲜胡萝卜洗净、擦干 ,切去尾部，切碎。称取碎鲜胡萝卜【 1 】10g 于小研钵 中,研碎。碎胡萝卜移至 50mL 三角烧瓶中，每次用丙酮 10mL 萃取2 次，再用 石油醚（bp30~60C）萃取固体两次，每次10mL。把石油醚溶液加到丙酮液中。 在分液漏斗中将混合液与 50mL 饱和氯化钠溶液【 2】振荡，分去下层，用蒸馏 水洗涤上层液两次，每次50mL,分去水，用无水硫酸钠干燥石油醚液（约 1h）, 把混合液倒入 50mL 圆底烧瓶中，热水浴加热蒸馏，除去溶剂， 得固体。在制得 的固体物加入3mL石油醚（bp60~90C）拌硅胶1g,在通风橱内抽干，得黄色 硅胶颗粒，待上柱。 2、 装柱和分离 取20cm*1cm色谱柱一根，垂直装置，以50ml三角烧瓶作洗脱液的接受器。用 镊子取少许脱脂棉【 3】放于干净的色谱柱底部，轻轻塞紧，再在脱脂绵上盖一 层厚0.5cm的海石砂（或用一张比柱内径略小的滤纸代替），关闭活塞，向柱内 倒入石油醚（bp60-90C）至约为柱高的3/4处，打开活塞，控制流出速度为1 滴/S。通过一干燥的玻璃漏斗慢慢加入层析硅胶。用洗耳球轻轻敲打柱身，使填 装紧密。当装填到 3/4 时，再在上面加一层 0.5cm 厚的海石砂，操作时一直保持 上述流速，注意不能使液面低于砂子的上层。当液面流至离海石砂面 1cm 时， 立即从玻璃漏斗加入已制备好的含胡萝卜素的黄色硅胶， 随后用0?5ml石油醚洗 下管壁的硅胶，如此连续 2—3 次，直至洗净为止，然后在色谱柱上装上滴液漏 斗，用石油醚（bp60- 90C）作洗脱剂进行洗脱，洗1滴/s。当有一黄色的谱带 分出，待黄色组分绝大部分洗出时，把洗脱剂换成 1： 9 丙酮一石油醚（ bp60- 90C）混液作洗脱剂进行洗脱，控制流出速度如前（这混液洗脱剂有助于混合物 中极性较大的组分移动），又可分出两个黄色组分。在 45—90min 内，柱中物料 将全部洗脱出来。 观察这些物料通过柱子的移动情况。 在三角烧瓶中收集 3 份洗 出液。用纸色谱、薄层色谱对各段洗出液进行色谱分析。 薄层色谱法 样品：柱色谱法中洗脱出的份样品液 展开剂： 1： 9 丙酮一石油醚溶液 薄层板的制备：取 3 片载波体，洗净，晾干。 在50ml烧杯中放置3g硅胶G,逐渐加入0.5%CmC水溶液8ml,调成均匀的糊 状，将此糊状物倾于上述洁净的载玻片圣桑， 用手将带浆的载玻片在水平的桌面 上做上下轻微的颤动， 并不时转动方向， 制成厚薄均匀， 表面光洁的平整的薄层 板，然后放在水平桌面上，在室温放置晾干后放入烘箱中，缓慢升温至 110C, 恒温0.5h ,取出，稍冷后置干燥器中备用。 点样：取出上述制好的薄层板， 分别在距一端点 1Cm 处用铅笔轻轻划一横线作为 起始线。用毛细管吸取少量样品液， 在一块板的起点线上点第一个色带的样品液， 根据柱色谱分离的色带，依次点样，如果样点颜色较浅，可重复点样，重复点样 前必须待前次样点挥干后进行。样点直径不超过 2mm。 展开：待样点干燥后，小心地放入已加入展开剂的 250ml 广口瓶中进行展开。 在瓶的内壁贴一张高5cm，环绕周长4/5的滤纸，下面浸入展开剂中，以使容器 内被展开剂蒸气饱和。点样一端浸入展开剂 0.5cm （样点不浸泡在展开剂中）。 盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升离板的上端 1cm 处取出，尽快用铅笔在展开剂 上升的前沿处划一记号，晾干后，量出展开剂和样点移动的距离，计算 Rf 值。 四、注意事项 1，本实验采取的工艺不同于其他工艺， 体现在原料粉碎时加入了稳定剂 （ 5ml 氨 水和35ml乙醇）来防止β —胡萝卜素被氧化，由此可提高提取率。 2、 色谱柱填装紧密与否，对分离效果很有影响。若柱中留有气泡或各部分松紧 不匀（更不能有断层或暗沟）时，会影响渗滤速度和显色的均匀。但如果填装时 过分敲击，又会因太紧密而流速太慢。 3、 加入砂子的目的是。在加料是不致把吸附剂冲起，影响分离效果。 4、 为了保持色谱柱的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶液或溶液中是必要的。否 则当柱中溶液流干时。柱身干裂，影响渗滤