分子医学技能：分子医学实验课题设计.pptVIP

分子医学实验课题设计 疾病机理 基因诊断 基因治疗 基因疫苗 复习相关理论知识,查阅相关文献 确定靶点 某遗传病的基因诊断 基因多态性的医学应用 选 题 查 阅 文 献 PubMed 中国期刊网全文数据库 /sites/entrez / 获得相关的背景资料和技术方法 整 体 方 案 目标:解决何问题 实验方法 实验技术 实验设备 实验耗材 预期结果和讨论 实验设计的基本内容 ? 实验目的与意义（为什么做？） ? 实验材料、试剂和仪器（用什么做？） ? 实验方法和步骤（怎样做？） ? 实验指标（看什么？） ? 实验预期结果与分析（如何评价） 举 例 题目：肝癌患者和正常人血清蛋白质分布的初步比较 1.研究目的与意义 通过比较肝癌患者和正常人血清中蛋白质的种类与数量的不同，了解肝癌患者血清中出现的异常蛋白和正常蛋白质的改变，初步探讨这种改变对肝癌诊断和判断病情的作用。 2.材料、试剂与仪器 标本：正常人血清、不同病程肝癌患者血清（早、中、晚期）、蛋白质标准对照 试剂：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳所用试剂 仪器与设备：电泳仪、电泳槽、染色缸、漂洗缸、烧杯、吸管、微量移液器 3.实验方法和步骤 方法：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 步骤： 试剂准备 制胶 样品处理 电泳 染色与脱色 4.实验观察指标 ① 聚丙烯酰胺凝胶上电泳区带的分布 ② 电泳区带颜色深浅 5.实验预期结果的描述 电泳显示与正常人相比肝癌患者血清在分子量40Kd处有异常电泳区带出现，该区带的颜色在早期肝癌患者较浅，随肝癌病程呈进行性增加，在肝癌广泛转移时表现颜色最深，经电泳图谱扫描显示，分别为？%，同时肝癌患者的清蛋白颜色变浅，定量显示为正常人的？%。 6.实验结果的分析及说明的问题 ① 异常蛋白的出现——诊断 ② 异常蛋白的变化——病情判断与预后 ③ 清蛋白的减少——肝癌时肝功能下降 DMD的基因诊断 疾病相关基因 依据基因特点及其突变特征建立实验方案 DMD的背景资料: PCR 核酸探针 SSCP RFLP…… 差异基因的表达 某种正常组织细胞与异常组织细胞、同一疾病在不同的发展时期细胞内基因表达谱的差异. 差异显示技术(DD-PCR) 代表性差异显示技术(RDA-PCR） 基因表达的系统分析(SAGE) 表达序列标签(EST) cDNA微阵列技术(cDNA micro assay) 蛋白质组学技术 hTERT基因: 细胞生长状态相关 hTERT基因 相关基因 (+) (-) 差异显示技术 基因多态性的医学应用 HLA 基因分型 (点杂交) PCR-SSCP ? 提 醒: 统计学分析 原始记录 重复实验 对照设立 提出问题 课题构思（意义） 干细胞 怎样诱导为…细胞 实验方案 查阅或设计实验方法 方案实施 实验设备、实验材料、实验步骤 预期结果 干细胞 提出问题 课题构思（意义） 实验方案 方案实施 预期结果 怎样延长其生存期? 种子细胞 查阅资料,寻找合适的途径 设计实验方法 实验设备、实验材料、实验步骤 提出问题 课题构思（意义） 实验方案 方案实施 预期结果 电泳技术分离血红蛋白 检测者的血红蛋白成分? 查阅或设计实验方法 实验设备、实验材料、实验步骤 提出问题 课题构思（意义） 实验方案 方案实施 预期结果 基因工程产品 什么产品? 怎样克隆其基因? 查寻GENE BANK PCR法扩增目的基因 选择合适的基因载体(质粒) 酶切和连接(重组质粒) 转化与筛选 获得阳性克隆