分子标记遗传图谱的构建方法---完整.pdf

. 分子标记遗传图谱的构建 检测出的每个分子标记反映的都是相应染色体座位上的遗传多态性状态。 为了有效地分 析利用分子标记所提供的遗传信息， 人们希望知道不同分子标记在染色体上的相对位置或排 列情况，也就是要构建分子标记的遗传连锁图谱。利用 DNA 标记构建遗传连锁图谱在原理 上与传统遗传图谱的构建是一样的。其基本步骤包括：选择适合作图的 DNA 标记；根据遗 传材料之间的 DNA 多态性，选择用于建立作图群体的亲本组合；建立具有大量 DNA 标记 处于分离状态的 分离群体或衍生系 ；测定作图群体中不同个体或株系的标记基因型； 对标记 基因型数据进行连锁分析， 构建标记连锁图。 至今为止， 已构建了许多植物的高密度分子标 记连锁图。本章侧重介绍利用 DNA 标记构建分子遗传连锁图谱的原理与方法。 第一节 作图群体的建立 要构建 DNA 标记连锁图谱，必须建立 作图群体 。建立作图群体需要考虑的重要因素包 括亲本的选配 、分离群体 类型的选择 及群体 大小的确定 等。 一、亲本的选配 亲本的选择直接影响到构建连锁图谱的难易程度及所建图谱的适用范围。 一般应从四个 方面对亲本进行选择，首 先要考虑亲本间的 DNA 多态性 。亲本之间的 DNA 多态性与其亲 缘关系有着密切关系， 这种亲缘关系可用地理的、 形态的或同工酶多态性作为选择标准。 一 般而言， 异交作物的多态性高 ，自交作物的多态性低。例如，玉米的多态性极好，一般自交 系间配制的群体就可成为理想的 RFLP 作图群体； 番茄的多态性较差， 因而只能选用不同种 间的后代构建作图群体；水稻的多态性居中，美国康乃尔大学 S.D.Tanksley 实验室 1988 年 发表的 RFLP 连锁图谱是以籼稻和爪哇稻之间的杂交组合为基础构建的（ McCouch et al. 1988）。在作物育种实践中，育种家常将野生种的优良性状转育到栽培种中，这种亲源关系 较远的杂交转育， DNA 多态性非常丰富。第二，选择亲本时应尽量选用纯度高的材料，并 进一步通过自交进行纯化。第三，要考虑杂交后代的可育性。 亲本间的差异过大， 杂种染色 体之间的配对和重组会受到抑制， 导致连锁座位间的 重组率偏低 ，并导致严重的 偏分离现 象， 降低所建图谱的可信度和适用范围； 严重的还会降低杂种后代的结实率， 甚至导致不育， 影 响分离群体的构建。 由于各种原因， 仅用一对亲本 的分离群体建立的遗传图谱往往不能完全 满足基因组研究和各种育种目标的要求，应选用几个不同的亲本组合，分别进行连锁作图， 1 / 15 . 以达到相互弥补的目的。第四，选配亲本时还应对亲本及其 F1 杂种进行细胞学鉴定。若双 亲间存在相互易位， 或多倍体材料（如小麦） 存在单体或部分染色体缺失等问题， 那末其后 代就 不宜用来构建连锁图谱 。