分子生物学-15-3-第八章真核基因表达调控-5-基因沉默.docVIP

PAGE 郜刚分子生物学教案 教学单元教案格式 第8章 真核基因表达调控 课程教案 授课题目：第08章 基因沉默 教学时数： 2 授课类型： eq \o\ac(□,√) 理论课 □ 实践课 教学目的、要求： 真核基因表达调控的活性染色质的变化（理解） 基因沉默的原理（掌握） 活性染色质结构 教学重点： 重点阐明：RNAi 重点指出：miRNA以及其基因表达抑制的关系。 本节重点指明活性染色质的结构上的调控 教学难点： 绝对难点：活性染色质活化的机制、特征 相对难点：无 教学方法和手段： 老师讲授为主：讲授 视频演示 PPT演示 讨论。以电脑幻灯片边演示边讲述为主，（白板课件）辅以板书（黑板板书） 学生回答问题为辅：（如时间等条件许可的情况下） 注：以下内容按实际需要进行取舍 要求有多媒体，因为信息量大，许多结构图需要媒体放映，效果才好 教学内容与教学设计： 8.4基因沉默 1、概念 基因沉默 RNA silencing 是指基因由于RNA干扰或者表观修饰等原因导致其不表达。 一种是转录水平上的基因沉默,另一种是转录后基因沉默（post-transcriptional gene silencing, PTGS) 。 也指在转基因动植物中外源基因不能正常表达,呈失活状态的现象 8.4.2 RNA干扰 RNAi RNA interference 将与mRNA编码区某段序列相对应的正义RNA 和反义RNA 组成的双链RNA 导入细胞，使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默(表达受抑制)。 这种小双链RNA称为小干扰RNA small interfering RNA，siRNA 实验1 Phenomena first observed in petunia，1988 Attempted to overexpress gene for pigment synthase in petunia. (trying to darken flower color) Caused the loss of pigment. 发现 Called co-suppression because suppressed expression of both endogenous gene and transgene. 实验2 反义RNA的确能够阻断par-1 基因的表达，但是注入正义链RNA作为对照，也同样阻断了基因的表达 实验3 证实，Guo S遇到的正义RNA抑制基因表达的现象，以及过去的反义RNA技术对基因表达的阻断，都是由于体外转录所得RNA中污染了微量双链RNA而引起 双链RNA可非常有效的特异性的选择并抑制基因的表达 该小组将这一现象称为RNA干扰（RNA interference， 简称RNAi） RNAi广泛存在于自然界 真菌、拟南芥、水螅、涡虫、锥虫、斑马鱼 这些生物体利用RNAi来抵御病毒的感染，阻断转座子的作用 RNAi很可能是出现于生命进化的早期阶段 RNAi的机制正在被逐步阐明： RNAi能高效特异的阻断基因的表达， 在线虫、果蝇体内，RNAi能达到基因敲除的效果 RNAi 机制：A model for the mechanism of RNAi siRNA的生物学意义 1. 通过降解目标基因RNA或者阻断其翻译而引发基因沉默 2. 通过介导组蛋白及DNA甲基化导致异染色质化而维护基因组的稳定性 3. 通过宿主与病毒的RNAi机制互作而保护基因组免受外源核酸侵入 8.4.3 1、DNA的甲基化 miRNA是一类微RNA，microRNA. 与siRNA有类似的功能，同样能够引起基因沉默 但是，沉默的效果和作用机制不尽相同 miRNA通常是内源的，siRNA通常是外源DNA引起的 MicroRNA: 是在真核生物中长约20-22个碱基的对基因表达起负调控作用的RNA分子。它对于发育，细胞分化，分形，凋亡，染色体结构及病毒抗性都起着极其重要的作用. miRNA的作用机制 动植物中有一定的区别，在于切割加工运输的酶类不同，比如植物中没有Drosha的同源基因， mechanisms of miRNA action miRNA还可以协助基因异染色质化 miRNA介导的翻译抑制机制 设计的理念：续上节 In 1995 Guo and Kemphues wanted to show that they had cloned the C. elegans par-1 gene (required for normal division of the zygote). Used antisense RNA to prove.