常用缓冲 液配置.docVIP

实验室常用缓冲液配置方案 １)1 M Ｔris—ＨCl (pH７。４, 7.6, 8.0)?组份浓度:1 M　Tｒｉs—HCl配制量:1 L 配制方法:　?1、 称量1２1.1 g Trｉs置于1　Ｌ烧杯中。 ２. 加入约800 ml得去离子水,充分搅拌溶解、 ?3。 按下表量加入浓盐酸调节所需要得pH值、 PH值 浓ＨCl　 7、4 约70ml ７。6 约60mｌ ８。０ 约42ml 4. 将溶液定容至１ L、 ５。 高温高压灭菌后,室温保存。　注意:应使溶液冷却至室温后再调定ｐH值,因为Trｉs溶液得pH值随温度得变化差异很大,温度每升高1℃,溶液得pH值大约降低0、03个单位。 ?2)1０×TE　Ｂuffer (pH７。4, 7、6,　8、０)组份浓度:10０ mM Tris－ＨCl,　10 mM ＥDＴA配制量:１ L 配制方法: 1。 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。 1M Ｔｒis-ＨＣｌ　Buｆｆer(ＰH７。４,7。６,８、0) １00ml 5０0mM ＥDTA(PH8、0)　 20ｍl 2、　向烧杯中加入约8０0 ml得去离子水,均匀混合、　?３。 将溶液定容至1　Ｌ后,高温高压灭菌、　4。 室温保存、 3)１。５　Ｍ　Tris-HＣl (pH８.8)?组份浓度:1．5　Ｍ Tｒｉｓ—HCl配制量:1 L　配制方法:　?１、 称量1８１．７ g Ｔrｉs置于1 L烧杯中。　２。 加入约80０　ml得去离子水,充分搅拌溶解。　3。 用浓盐酸调节pＨ值至8。８。 ?4、 将溶液定容至1　L。　?5。 高温高压灭菌后,室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tｒiｓ溶液得pH值随温度得变化差异很大,温度每升高1℃,溶液得pH值大约降低0。0３ 4)3 M 醋酸钠(pH5.2)?组份浓度:3Ｍ 醋酸钠 ?配制量:１０0ml?配制方法: ?1、称量４0.8g　NａＡc·3Ｈ2Ｏ置于1０0－２00ｍl烧杯中,加入月40ml得去离子水搅拌溶解 2.加入冰醋酸调节ｐH值至５。2?3、加去离子水将溶液定容至１０0mｌ?4高温高压灭菌后,室温保存。 5)PBS Ｂｕffｅr?组份浓度:1３7　ｍM ＮaCｌ, 2．７ mM ＫCl, １0 ｍM Ｎa2HPＯ4,　2 mM KＨ2PＯ4?配制量:1　L ?配制方法:　1、 称量下列试剂,置于１ L烧杯中。 ＮａＣl ８ｇ ＫCl　 0。2g Nａ2HPO4　 1．42ｇ　 KH２ＰＯ４ ０．27g 2、 向烧杯中加入约800　mｌ得去离子水,充分搅拌溶解、 ?3。 滴加浓盐酸将pＨ值调节至7。４,然后加入去离子水将溶液定容至1　L。 4、 高温高压灭菌后,室温保存。　?注意:上述PBS Buffeｒ中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CａCl2与0.5 mM　MgCl2。 ? ６)10 M 醋酸铵　组份浓度:１0　M 醋酸铵 配制量:1０0 ｍl?配制方法:　?1、 称量77、1 ｇ醋酸铵置于100～2０0　ml烧杯中,加入约３0 ml得去离子水搅拌溶解。 2、 加去离子水将溶液定容至10０ ml。 ３、 使用0、22　mm滤膜过滤除菌。 4、　密封瓶口于室温保存。 ?注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。　 ７)苯酚／氯仿／异戊醇　(25 : 24 : １)配制方法: 1、 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚／氯仿/异戊醇(25　: ２４ :　1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相得分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现得气泡。　2、　配制方法:将Tris—HCl平衡苯酚与等体积得氯仿／异戊醇(24 :　1)混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。 ８)１0% (W/V) SDS?组份浓度:10％ (W/V)SDS?配制量:10０mｌ配制方法:　?1。称量10g高纯度得SDS置于1０0—２０0ml烧杯中,加入约8０mｌ得去离子水,６8℃加入溶解 2。滴加浓盐酸调节pＨ值至7、2?３。将溶液定容至10０mｌ后,室温保存。 ９)２　N　NaOＨ组份浓度:2 N NaOＨ配制量:1０0　ｍl配制方法:　1。 量取8０ ml去离子水置于100～200　mｌ塑料烧杯中(ＮaOＨ溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。 ?２。 称取8 g　ＮaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。　3。 待NaＯＨ完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至10０ ｍl。 ?４.　将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。 10)２.5 N　ＨCl?组份浓度:2、５ N HCl配制量:１０0 ml?配制方法: ?1、 在7８、４　mｌ得去离子水中加入21.6 m