744溶血与凝聚检查法检验操作规程.docVIP

广东和本堂科技制药有限公司 文 件 名 溶血与凝聚检查法检验操作规程 页数 1 of 2 文件编号 OS-QC-744-00 生效日期 年 月 日 制 定 人 审 核 人 批 准 人 制定日期 审核日期 批准日期 颁发部门 质量保证部 分发部门 质量保证部 变更原因： 目的：保证操作规范化,确保测定结果准确、可靠。 范围：适用于注射用药品的溶血与凝聚现象的测定。 职责：负责该项检查的化验员。 规程 简述：本法系将一定量供试品与2%的兔（或羊）红细胞混悬液混合，温育一定时间后，观察其对红细胞状态是否产生影响的一种方法。 试剂与仪器用具：恒温箱、载玻片、试管、25ml离心管、离心机、显微镜、玻璃珠、锥形瓶、0.9%氯化钠溶液、兔或羊血。 方法 3.1 2%红细胞混悬液的制备 取兔或羊血数毫升（约20ml），放入含玻璃珠的锥形瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，每分钟1000～1500转离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2～3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%的混悬液，供试验用。 3.2 供试品溶液的制备 除另有规定外，临床用于非血管内给药的注射剂，以各药品使用说明书规定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1：3稀释后作为供试品溶液；用于血管内给药的注射剂以各药品使用说明书规定的临床使用浓度作为供试品溶液。 3.3 检查法 取洁净试管5只，编号，1、2号管为供试品管，3号管为阴性对照管，4号管为阳性对照管，5号管为供试品对照管。按下表所示依次加入2%红细胞混悬液，0.9%氯化钠溶液或蒸馏水，混匀后，立即置37℃±0.5℃的恒温箱中进行温育。3小时后观察溶血和凝聚反应。 文件名 溶血与凝聚检查法检验操作规程 文件编号 OS-QC-744-00 页数 2 Of 2 试管编号 1、2 3 4 5 2%红细胞混悬液/ml 2.5 2.5 2.5 0.9%氯化钠溶液/ml 2.5 2.5 4.7 蒸馏水/ml 2.5 供试品溶液/ml 0.3 0.3 如试验中的溶液呈澄清红色,管底无细胞残留或有少量红细胞残留,表明有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液无色澄明，或上清液虽有色澄明，但1号管和5号管比色无显著差异，则表明无溶血发生。 若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，表明有红细胞凝聚发生。如有红细胞凝聚的现象，可按下法进一步判定是凝聚还是假凝聚。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物置于载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴0.9%氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能冲散者为假凝聚，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为凝聚。 3.4 结果判断 当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若供试品管中的溶液在3小时内不发生溶血或凝聚，判供试品符合规定；若供试品管中的溶液在3小时内发生溶血和（或）凝聚，判供试品不符合规定。