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肿瘤相关巨噬细胞通过外分泌microRNA-10a促进上皮性卵巢癌的干性 摘 要 背景与目的： 卵巢癌因其较高的恶性生物学行为、化疗耐药及复发率，是死亡率最高的妇 科恶性肿瘤，严重危害世界女性健康。卵巢癌细胞干性是卵巢癌化疗耐药的重要 因素。肿瘤相关巨噬细胞（TAMs），一种肿瘤微环境中最重要的细胞成分，与卵 巢癌的化疗耐药密切相关，因此我们提出TAMs可能促进了卵巢癌细胞的干性。 已有许多研究表明TAMs可通过microRNA 与肿瘤细胞相互作用，并调节其耐药 性。通过分析TCGA数据库，我们发现microRNA-10a （miR-10a）与卵巢癌患者 的生存期负相关。综上，我们认为上皮性卵巢癌中的TAMs对卵巢癌细胞干性的 促进可能是通过miR-10a 实现的。通过接下来的研究，我们将证明这些假设，并 更深入的了解卵巢癌的发病机制，从而为治疗靶点的研究提供理论基础。 方法： R 本研究将收集卵巢癌组织及非癌卵巢组织；培养卵巢癌细胞株；用 语言分 析TCGA数据库中卵巢癌的相关数据；运用流式细胞分选得到TAMs细胞及肿瘤 干细胞样上皮性卵巢癌细胞；将上皮性卵巢癌细胞株（SKOV-3）与卵巢癌组织中 获得的TAMs共培养；用qRT-PCR、荧光原位杂交检测卵巢癌组织、TAMs细胞、 卵巢癌细胞、共培养细胞中的miR-10a或干性标志物。 结果： 流式分选发现与癌旁正常卵巢组织相比，上皮性卵巢癌组织中TAMs 的比例 显著升高。将癌组织中获得的TAMs与上皮性卵巢癌细胞共培养后，卵巢癌细胞 干性标志物SOX2、OCT4表达明显升高，表明卵巢癌中的TAMs促进卵巢癌细胞 的干性。通过分析TCGA数据库中两组卵巢癌相关数据，我们发现miR-10a 与卵 巢癌的预后呈负相关。进一步荧光原位杂交及qRT-PCR均表明与卵巢良性组织相 比，卵巢癌组织高表达miR-10a。运用qRT-PCR，发现卵巢癌组织中分离的TAMs miR-10a SKOV-3 miR-10a 比癌旁正常卵巢组织中 水平显著升高。 中 基线水平较 I 肿瘤相关巨噬细胞通过外分泌microRNA-10a促进上皮性卵巢癌的干性 TAMs SKOV-3 miR-10a 低，但与卵巢癌中分离的 共培养后， 中 水平也升高。就此 我们初步证明了卵巢癌中的TAMs 高表达miR-10a，并可作用于卵巢癌细胞。最 后，通过流式细胞分选与TAMs共培养后的卵巢癌细胞，分别得到表面干性标记 物CD44 阳性及阴性的细胞，qRT-PCR检测两组细胞中miR-10a 的表达发现其在 + CD44 的卵巢癌细胞显著升高，初步证明了miR-10a促进卵巢癌细胞的干性。 结论：肿瘤相关巨噬细胞可以促进上皮性卵巢癌的干性，其途径可能是miR- 10a通路。 关键词：上皮性卵巢癌；肿瘤相关巨噬细胞；microRNA-10a；干性 II TumorAssociatedMacrophage-DerivedMicroRNA-10aPromotesStemnessofOvarianCancer Abstract Background: Ovarian cancer accounts for the highest mortality amongst all gynecologic malignancies due to its aggressive malignant biological behavior, as well as its high chemotherapy resistance and recurrence rate, which seve