环境温度骤降对小鼠肠道过敏反应的影响及机制研究.pdfVIP

环境温度骤降对小鼠肠道过敏反应的影响及机制研究 摘要 背景：食物过敏是食用某种食物成分后，使机体处于致敏的状态，当这种食物成分 再次进入机体时引起异常的免疫反应，引发一连串的临床症状。通常认为食物过敏是食 物中的某些抗原激发了肠道免疫系统，Th1 （辅助性T 细胞1）和Th2 （辅助性T 细胞2） 之间的平衡被破坏，产生以Th2 为主导的免疫反应。鸡蛋是较为常见的食物过敏原， OVA （卵清白蛋白）是其关键成分。冷应激是我国北方地区外部环境主要的应激原，已 被证实是引起小肠炎症的因素之一。c-Jun 氨基末端激酶与冷应激诱导的肠上皮屏障功 能损坏有关。机体应激状态下热休克蛋白家族表达水平会明显上升，尤其是HSP70，用 作分子伴侣从而对机体发挥应激保护的作用。考虑到食物过敏和环境温度骤降的普遍 性，从而提出探究外界环境温度骤降（swiftlydroppingtemperature，SDT）是否会促发 食物过敏反应以及发生的机制。 目的：利用OVA建立小鼠食物过敏实验模型，研究SDT是否能促发小鼠的食物过 敏反应，并探究SDT促发食物过敏机制，为防止食物过敏的发生提供新的理论基础和 实验证明。 6-8 BALB/C 30 Naive SDT/OVA Sham/OVA 方法：雌性 周 小鼠 只随机分成 、 、 、 SDT/saline、Sham/saline五组，每组6 只。SDT表示小鼠生活环境温度骤降至4℃持续1 OVA OVA saline OVA Sham 小时， 表示对小鼠采用 致敏， 表示用生理盐水代替 处理小鼠， 表示用假刺激处理小鼠。观察小鼠的临床症状（腹泻、肛温、行动异常等）；ELISA 检 测血清中IgE、IgG1 水平和肠组织蛋白中IL-4、IL-5、IL-13 含量；肠道病理切片HE 染 Westernblot IL4 色观察炎性程度，免疫荧光染色观察肥大细胞； 检测肠道 表达水平；分 离小肠LPMCs 并用流式细胞术检测免疫细胞（嗜酸性粒细胞、肥大细胞、巨噬细胞、 CD4+T 细胞）及ILC2 比例；荧光酶标仪检测小鼠血清Dextran 含量；Westernblot 检测 Occludin ZO-1 Claudin-1 JNK1/2 HSP70 紧密连接蛋白（ 、 、 ）、 、 的表达量；用免疫沉淀 实验在紧密连接蛋白中检测到泛素；采用Transwell 技术检测T84 细胞的TER 变化，收 集内室培养基测荧光强度变化。 1 SDT SDT OVA 结果：（） 可以促发小鼠食物过敏的临床症状； 使 模型小鼠血清中 sIgE IgG1 Th2 、 的水平升高， 型细胞因子含量升高；从小鼠空肠组织的病理切片看出 SDT促使OVA 小鼠炎性细胞浸润增加、肥大细胞的数目增多；小鼠的食物过敏反应由 I 环境温度骤降对小鼠肠道过敏反应的影响及机制研究 SDT 2 SDT LPMC ILC2 促发。（ ）从流式细胞术的结果看出 改变小鼠 中免疫细胞比例和 比例；（3）WB 和IP 结果显示SDT 导致OVA 小鼠JNK1/2 增多,引起HSP70 磷酸化， 继而引起紧密连接蛋白降解，肠道屏障被破坏。