环状RNA MAN2B2通过miRNA-217_MAPK1轴促进肝细胞癌细胞的细胞增殖.pdfVIP

环状RNA MAN2B2通过miRNA-217_MAPK1轴促进肝细胞癌细胞的细胞增殖.pdf

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CircRNA MAN2B2 通过 miRNA-217 / MAPK1 轴促进 HCC 的细胞增殖 摘 要 目的:探讨 circRNA MAN2B2 在肝癌中的表达及可能的调控作用机制。 方法:1、本实验共入组 32 名肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)患者,搜 集病人手术期间切除的肝癌组织以及对应的癌旁正常组织,随后研磨该组织标本并提取 RNA,通过 qPCR 分析组织中 circRNA MAN2B2 的表达情况;构建三种细胞系:HL-7702 (正 常肝细胞)、HepG2 肝癌细胞和 HuH-7 肝癌细胞,提取细胞 RNA 用 qPCR 方法验证细胞系 中环形RNA MAN2B2 的表达情况。2、采用脂质体转染法将特异性针对 CircRNA MAN2B2 的 siRNA 质粒载体转染到 HepG2 和 Huh7 细胞中,qPCR 筛选阳性细胞,CCK8 和 EdU 实验 测定细胞的增殖情况;运用携带有环形 RNA MAN2B2 基因全长序列的重组质粒载体转染 到正常肝细胞中,qPCR 测定细胞筛选结果,CCK8 和 EdU 实验测定细胞的增殖情况。3、 利用双荧光素酶报告基因实验、RT-PCR 实验验证 CircRNA MAN2B2 与微小 RNA(microRNA, miRNA) miRNA-217 的关系;4、双荧光素酶报告基因实验、RT-PCR 实验验证 miRNA-217 与 MAPK1 之间的关联;5、CCK8 和 EdU 实验验证 CircRNA MAN2B2 与 MAPK1 的关系。 结果:1、与癌旁正常组织相比,circRNA MAN2B2 在肝癌组织中表达上调;与 HL-7702 相比,circMAN2B2 在 Hep-G2 和 Huh-7 细胞中高度表达。2、成功构建 si-CircRNA MAN2B2 肝癌细胞系,细胞中 CircRNA MAN2B2 表达降低抑制肝癌细胞的增殖;成功构建 Over-CircRNA MAN2B2 肝细胞系,细胞中 CircRNA MAN2B2 表达增加促进肝细胞的增殖; 3、circMAN2B2 与 miRNA-217 存在相互作用,在 si-CircRNA MAN2B2 肝癌细胞系中 miRNA-217 表达明显增加,在 Over-CircRNA MAN2B2 肝细胞系中明显降低;4、在 si-miRNA217 肝癌细胞系中 MAPK1 表达明显增加,在 Over-miRNA217 肝细胞系中明显降 低;5、在过表达CircRNA MAN2B2 细胞系中 MAPK1表达明显增加,在下调 CircRNA MAN2B2 肝癌细胞系中 MAPK1 表达明显降低,且过表达 MAPK1 能够弥补 CircRNA MAN2B2 表达降 低对癌细胞增殖的抑制作用。 1 CircRNA MAN2B2 通过 miRNA-217 / MAPK1 轴促进 HCC 的细胞增殖 结论:1. circRNA MAN2B2在肝癌组织及肝癌细胞中表达明显增加;2.circRNA MAN2B2 通过 miRNA-217/MAPK1 轴进而促进肝癌细胞的增殖。 关键词:miR-217,MAPK1,circMAN2B2,肝细胞肝癌。 2 Circular RNA MAN2B2 promotes cell proliferation of hepatocellular carcinoma cells via the miRNA-217/MAPK1 axis Abstract Purpose:To explore the expression of circRNA MAN2B2 in liver cancer and its possible regulatory mechanism. Methods: 1. Thirty-two patients with liver cancer (Hepatocellular carcinoma, HCC) were collected in t

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