HIF-1a在蓝光介导的人视网膜色素上皮细胞自噬激活中的机制研究.pdfVIP

HIF-1 α在蓝光介导的人视网膜色素上皮细胞自噬激活中的机制研究 摘 要 目的：本文旨在探究 HIF-1 α与自噬在蓝光诱导的人视网膜色素上皮细胞光损伤中 的作用，及两者间可能存在的作用关系，为深入研究年龄相关性黄斑变性病理机制及防 治视网膜光损伤类疾病提供新思路和理论依据。 方法：构建光强度（2000±500）Lux 的LED 蓝光模型，对体外培养的人视网膜色素 上皮细胞（ARPE-19 细胞株）进行 2h、4h、6h、8h 照射，倒置相差显微镜观察细胞形态 学变化，CCK-8 法检测细胞增殖活力改变，western blot 及 qPCR 法检测自噬标志物及 HIF-1 α表达的变化；选取蓝光照射8h 这一时间点，使用 Rapa 及 3-MA 干预自噬水平， CCK-8 法检测细胞增殖活力，应用 YC-1 干预 HIF-1 α的表达，CCK-8 法检测细胞增殖活 力，western blot 法检测 HIF-1 α/BNIP3 通路蛋白及自噬相关蛋白的改变。 结果：1.蓝光对 ARPE-19 细胞形态及增值活力的影响：蓝光照射 4h 后细胞形态发 生改变，细胞变小、变圆，细胞周围见透亮圈，胞质见空泡，胞核皱缩；与无光照组比， 各蓝光组细胞增殖活力均显著降低，光损伤具有时间依赖性，但随光照时间延长损伤加 重的速度减慢（P0.05）； 2.蓝光对 ARPE-19 细胞自噬水平及 HIF-1 α表达的影响：western blot 及 qPCR 结 果显示与无光照组相比，各蓝光组 Beclin-1、LC3II/LC3I 表达显著增加，p62 表达显著 降低，HIF-1 α表达显著增加，且表达量随光照时间延长而增加，蓝光8h 时最大（P0.05）； 3.蓝光下干预自噬对 ARPE-19 细胞增殖活力的影响：与对照组相比，自噬抑制剂 3-MA 可显著降低 ARPE-19 细胞的增殖活力，自噬激活剂 Rapa 可显著提高 ARPE-19 细胞 的增殖活力（P0.05）； 4.蓝光下干预 HIF-1 α对 ARPE-19 细胞增殖活力的影响：蓝光下抑制剂 YC-1 可显著 降低ARPE-19 细胞的增殖活力，且随 YC-1 浓度增加细胞增殖活力下降（P0.05）； 5.蓝光下干预 HIF-1 α对 ARPE-19 细胞 HIF-1 α/BNIP3 通路蛋白及自噬相关蛋白的 影响：与对照组相比，YC-1 组 HIF-1 α、BNIP3、自噬标志蛋白 LC3II/LC3I、Beclin-1 表达显著减少、p62 表达显著增加（P0.05）。 结论：1.蓝光能够诱导体外培养的 ARPE-19 细胞损伤，损伤具有时间累积性，但损 伤加重的速度减慢。 2.蓝光能够诱导体外培养的 ARPE-19 细胞自噬过程的激活，且自噬对蓝光暴露后细 I HIF-1 α在蓝光介导的人视网膜色素上皮细胞自噬激活中的机制研究 胞的损伤具有保护作用，能一定程度阻止损伤的进一步加重。 3.蓝光照射能够诱导体外培养的 ARPE-19 细胞 HIF-1 α的表达，且可能通过HIF-1 α/BNIP3 途径参与蓝光诱导的 ARPE-19 细胞自噬过程的调控。 关键词：HIF-1 α；蓝光；视网膜色素上皮；自噬；年龄相关性黄斑变性 II Autophagy activated via HIF-1α to protect against blue light-mediated damage in human retinal pigment epithelium cells Abstract Objective: The aim of this study was to explore the role of HIF-1α and autophagy in response to blue light damage in human retinal pigment epithelium （hRPE ）cells