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人脂肪干细胞通过外泌体促进 HaCat 的氧化应激损伤修复 摘 要 背景： 皮肤的损伤修复是一个全球性的问题。近年来，已有大量证据表明脂肪组织来源的 干细胞能加速皮肤的损伤修复，有些甚至都已经应用于临床治疗中。虽然脂肪组织来源 的干细胞在修复和再生各种损伤组织方面有潜在的应用价值，但很少有研究涉及 hADSC 来源的外泌体对损伤修复的影响。而事实上干细胞发挥修复作用离不开它们的旁分泌作 用，外泌体作为旁分泌的载体之一，是否也承担着相应的职责。本文希望能为外泌体加 速伤口愈合的再生疗法提供最新证据。 目的： 初步探究人脂肪干细胞源外泌体对氧化应激损伤的表皮细胞迁移功能的影响。 方法： 首先我们从正常人抽脂手术获取的脂肪来分离脂肪干细胞，并扩增细胞，收集上清， 采用超速和超滤结合的方法分离出外泌体。其次我们使用了透射电镜、纳米颗粒分析仪 以及免疫印迹来鉴定分离出的外泌体。然后我们用共聚焦显微镜观察 pkh26 标记的外泌 体能够被 HaCat 摄取，并利用 100 μmol H O 处理 1h 制备了 HaCat 细胞轻中度损伤模型， 2 2 以模拟皮肤创伤时氧化应激的生理状态，最后又通过功能实验进行验证，以观察脂肪干 细胞来源的外泌体是否具有抗氧化应激和促进 HaCat 迁移的能力。 结果： 1、 体外研究表明，来源于 hADSCs 细胞上清的纳米级囊泡 TEM 是直径 60-80nm 茶托样纳 米囊泡，CD63、Alix 和 TSG101 外体标志物阳性，DSL 测量显示分离所得外泌体纯度 为 65.88%，具有外泌体的基本特征。 2、 体外 HaCat 氧化应激模型结果：CCK8 法显示，0，50，100，200，250，300，400， 500，600，800 μmol H O 损伤处理 HaCat 细胞 1h 后，HaCat 细胞存活率呈逐渐降低 2 2 趋势（R=0.911，P0.01）。H O 会降低 HaCat 细胞活力，刺激细胞产生 ROS 信号，并 2 2 进一步损伤细胞产生 MDA，且呈剂量依赖性。 3、 分离的外泌体能被损伤后的 HaCat 细胞摄入，划痕实验结果显示 HaCat 细胞的 12h 划痕面积修复率：空白对照组、空白治疗组、损伤对照组、损伤治疗组修复率（%） I 人脂肪干细胞通过外泌体促进 HaCat 的氧化应激损伤修复 分别是 40.26%±0.64%、69.57%±0.69%、32.28%±0.31%、69.62%±1.68%。损伤治 疗组修复率（69.62%±1.68%）显著高于损伤对照组 （32.28%±0.31%，t=37.847， P0.015）；Transwell 实验所示：空白对照组、空白治疗组、损伤对照组、损伤治疗 组 10 倍镜视野下迁移细胞平均数分别是 20.85±4.837、44.8±5.237、14.95± 2.584、40.05±7.660,损伤治疗组细胞迁移数目大于损伤对照组（t=13.88，P0.01）。 结论： 通过体外实验，我们初步验证了 hADSCs-Exos 在 HaCat 迁移中的治疗作用，为进一 步明确hADSCs-exos 在促进伤口愈合方面发挥重要作用提供证据。 关键词：脂肪干细胞；旁分泌；外泌体；氧化应激；创伤修复；无细胞治疗 II The Exosomes of Human Adipose Stem Cells Promote HaCat to Repair Oxidative Stress Damage Abstract Background: The skin is the largest organ system of the body. Compromised impaired healing of cutaneous wounds and ulcers continues t