DEHP促进巨噬细胞M2极化加重过敏性哮喘的机制研究.pdfVIP

DEHP 促进巨噬细胞M2 极化加重过敏性哮喘的机制研究 摘 要 背景：过敏性哮喘目前仍然是公共卫生和医学上一个重大的全球性问题。屋尘螨 （HDM ）是世界上大部分地区过敏性气道疾病相关的最常见过敏原之一。近二十年 来，工业化和城市化所产生的环境污染不断加剧，环境污染物中的多环芳香烃 （PAHs ）、邻苯二甲酸酯 （PAEs ）等可能是造成哮喘及其他过敏性疾病高发与病情恶 化的原因。但是，环境污染物与哮喘发病的因果关系尚未建立，其作用机制不甚清 楚。邻苯二甲酸二辛酯 （DEHP ）作为最常见的邻苯二甲酸酯之一，在世界范围内广泛 存在。DEHP 往往被用于聚氯乙烯 （PVC ）中的增塑剂，因其不与PVC 化学结合，会 浸出并迁移到室内空气、大气和饮用水中，而食品包装中使用的DEHP 也会存在于食 品中。经食物和水摄入是人体暴露于DEHP 的主要途径，其次可能是呼吸吸入和经由 皮肤摄入。DEHP 在生物体内极易代谢成邻苯二甲酸单乙基己基酯（MEHP ）从而发挥 毒性作用。流行病学研究表明DEHP 暴露与过敏性哮喘之间存在明显的正相关关系， 特别是对于过敏性哮喘患儿。过敏性哮喘的特征不仅在于Th1/Th2 失衡，还包括巨噬 细胞在内的各种免疫细胞的失调。尽管尚未完全了解M2 型巨噬细胞的作用，但已知 它们会促进Th2 免疫反应。有研究报道哮喘患者中M2 型巨噬细胞数量与哮喘症状严 重程度相关，并促进过敏性哮喘中的Th2 炎症反应。 目的：通过小鼠模型模拟人类长期低剂量暴露于DEHP ，探讨DEHP 是否经由 PPARγ 信号通路影响肺巨噬细胞M2 极化进而加重Th2 过敏反应，并试图探究MEHP 对巨噬细胞产生影响的机制。 方法：（1）建立DEHP 暴露小鼠过敏性哮喘模型，检测过敏性哮喘相关指标，如 小鼠气道高反应、肺泡灌洗液细胞因子和细胞组成、血清HDM 特异性IgE 指标、肺组 织切片、脾细胞Tregs 和肺组织氧化应激等相关指标；（2 ）建立DEHP 暴露小鼠过敏 性哮喘模型，观察小鼠肺部M2 型巨噬细胞数量和比例变化，检测小鼠肺组织转录因 子PPARγ 和M2 型巨噬细胞标记物Arg1 表达水平变化；（3 ）细胞实验观察DEHP 代 谢产物MEHP 对骨髓来源巨噬细胞 （BMDMs ）M1/M2 极化的影响；（4 ）抑制或沉默 PPARγ 基因表达，观察Arg1 表达是否依赖于PPARγ ；（5 ）染色质免疫共沉淀实验 （CHIP ）验证PPARγ 对M2 型巨噬细胞标记物Arg1 、Fizz1 、Ym1 启动子的结合； I DEHP 促进巨噬细胞M2 极化加重过敏性哮喘的机制研究 + （6 ）MEHP 刺激M2 型巨噬细胞后与CD4 T 细胞共培养，观察Th1/Th2 细胞比例变 化。 结果：（1）DEHP 暴露显著加重HDM 诱导的小鼠过敏性哮喘，包括引起气道高反 应和肺组织损伤加重、血清IgE 水平升高、肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞增多以及IL4 、 IL5 、IL13 炎性因子水平升高；（2 ）DEHP 暴露导致小鼠肺部M2 型巨噬细胞比例和数 量增多，肺组织PPARγ 和Arg1 水平升高；（3 ）MEHP 有助于BMDMs 极化为M2 型 巨噬细胞并且依赖于PPARγ 活化；（4 ）MEHP 可上调转录因子PPARγ 表达，PPARγ 结合Arg1 、Fizz1 、Ym1 基因启动子增加相应基因表达从而促使巨噬细胞M2 极化； + + + （4 ）MEHP 刺激M2 型巨噬细胞后与CD4 T 细胞共培养，CD4 IL4 细胞比例明显上 升，MEHP 有助于巨噬细胞M2 极化，并以上调Th2 细胞比例的方式加重过敏性哮 喘。 关键词：DEHP ；过敏性哮喘；M2 型巨噬细胞；PPARγ II A study of DEHP exacerbates allergic asthma by affecting macrophage polarization