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病毒载体介导 C3 基因表达对大小鼠的降眼压作用研究 摘 要 目的：研究病毒载体介导的外酶 C3 转移酶基因治疗对大鼠和小鼠的降眼压 作用，为其临床应用提供安全性及有效性实验依据。 方法：购买雄性 C57BL/6 小鼠 40 只。使用自身互补双链腺相关病毒 2 型 （self-complementary adeno-associated viral vector type 2, scAAV2）为 载体并可分别表达 C3 和增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）基因的病毒（scAAV2-C3 和 scAAV2-EGFP），对正常眼压的30 只 C57BL/6 小鼠进行前房注射，其中 15 只小鼠注射 scAAV2-C3 （单眼剂量： 5×1011 12 vg，1 μl），另外 15 只注射 scAAV2-EGFP （单眼剂量：1×10 vg，0.5 μl），10 只正常眼压的小鼠作为空白对照。记录第 7 天的眼压，使用 MicronⅣ型视网膜 成像仪观察房角增强绿色荧光蛋白的表达。购买雄性 SD 大鼠 16 只,使用慢病毒 （lentivirus, LV）为载体并可分别表达 C3 和增强绿色荧光蛋白基因的病毒 （LV-C3-EGFP 和 LV-EGFP），对正常眼压的 16 只大鼠进行前房注射，左眼注射 8 LV-C3-EGFP （单眼剂量：8 ×10 TU，5 μl），右眼注射 LV-EGFP （单眼剂量：5 ×108 TU，8 μl），左右眼进行对照。分别记录第 0 天、第 7 天、第 21 天、第 35 天的眼压。实验过程中使用裂隙灯生物显微镜观察大鼠前房有无炎症。使用 MicronⅣ型视网膜成像仪观察房角增强绿色荧光蛋白的表达。 结果：1.整个实验过程中前房注射了 scAAV2-C3 和 scAAV2-EGFP 的小鼠，以 及前房注射 LV-C3-EGFP 和 LV-EGFP 的大鼠均未引起明显的前房炎症。2.LV 和 scAAV2 可携带目的基因转染到眼前房角上稳定表达一段时间，LV 载体的大鼠房 Ⅰ 病毒载体介导 C3 基因表达对大小鼠的降眼压作用研究 角荧光在第 7 天出现，第 21 天最亮，至少持续到第 35 天。通过对实验小鼠的眼 压测量发现 scAAV2-C3 组相比 scAAV2-EGFP 组和空白对照组明显降低。4.通过对 实验大鼠的眼压测量发现LV-C3-EGFP 组相比 LV-EGFP 组明显降低。 结论：以上结果表明，scAAV2-EGFP 和 scAAV2-C3 的前房注射，LV-C3-EGFP 和 LV-EGFP 的前房注射未引发明显前房和眼内炎症，对其生长活动影响较小。 scAAV2 和 LV 介导的外酶 C3 转移酶基因治疗能够降低大鼠和小鼠眼压并且病毒 载体介导的外酶 C3 转移酶和增强绿色荧光蛋白能够在眼前节稳定表达一段时间， 利用病毒载体将 C3 基因转染到小梁网组织中表达后降眼压，作为青光眼的基因 治疗方法存在一定的潜力。 关键词：青光眼；基因治疗；scAAV2；LV ；外酶 C3 转移酶 Ⅰ 病毒载体介导 C3 基因表达对大小鼠的降眼压作用研究 ABSTRACT Objective: To study the IOP lowering effect of viral vector mediated exoenzyme C3 transferase (C3) gene therapy on intraocular pressure in rats and mice, and to provide experimental basis for its safety and effectiveness. Methods: Thirty male C57BL/6