组蛋白乙酰转移酶PCAF在葡萄糖缺乏诱导肿瘤细胞周期阻滞中的机制研究.pdfVIP

组蛋白乙酰转移酶 PCAF 在葡萄糖缺乏诱导肿瘤细胞周期阻滞中的机制研究 摘 要 + SIRT7 作为 Sirtuins 家族成员中一员，依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD ）发挥 乙酰转移酶活性。SIRT7 可特异性地对组蛋白 H3 的第 18位赖氨酸（H3K18）发生去乙酰 化修饰，还参与调控了许多非组蛋白的去乙酰化修饰。由于 SIRT7 的酶活性受到了细胞 + 中NAD 水平的调节，因此 SIRT7 被认为是一个能量感应因子。先前的报道表明葡萄糖缺 乏可以诱导细胞发生 p53/p21 通路依赖性的细胞周期阻滞。因此研究 SIRT7 是否参与以 及如何调控葡萄糖缺乏诱导 p53/p21 通路的激活是非常有意义的。 我们之前的工作已经在人直肠癌细胞 HCT116 细胞中证明了葡萄糖缺乏引起的细胞 周期阻滞受到了 SIRT7 的调控，并且是通过间接调控 p53 蛋白稳定性的方式来发挥作用， 而且我们还发现 SIRT7 是通过调节 p53 蛋白的一个主要 E3 连接酶 MDM2 的泛素降解来调 控 p53 稳定性，但是并没有得到 SIRT7 可以直接调控 MDM2 的证据，因此其中的调控分 子机制需要进一步去探究。 PCAF(p300/CBP-associated factor)作为可与 E1A 竞争性结合 p300/CBP 的乙酰转 移酶，参与了细胞的许多生理过程，包括细胞转录、细胞分化以及增殖等。后来的研究 发现 PCAF 不仅具有乙酰转移酶的活性，也具有 E3 连接酶的功能，可以促进 MDM2 蛋白 泛素化修饰，进而促进了 MDM2 蛋白进行泛素-蛋白酶体途径降解。我们先前的研究在 HCT116 细胞中阐明了SIRT7 可以与 PCAF 直接结合，并且 SIRT7 可以直接对 PCAF 蛋白的 第 720 位赖氨酸进行去乙酰化修饰。 本研究是在先前一系列实验结果的基础上在人骨肉瘤 U2OS 细胞系中进一步地证实 了 SIRT7 通过调控 MDM2 降解来调节 p53 稳定性以及经葡萄糖缺乏处理后增强了 SIRT7 与PCAF 之间相互作用。我们发现PCAF 是 SIRT7调节MDM2 降解的重要蛋白，PCAF 与SIRT7 结合后被 SIRT7 去乙酰化修饰，增强了其与 MDM2 蛋白的相互作用，进而增加 MDM2 蛋白 的泛素化水平，导致MDM2 降解来增强 p53 蛋白的稳定性。我们的实验结果也表明了 PCAF 蛋白也是葡萄糖缺乏诱导活化 p53/p21 途径的重要因素，因为 PCAF 敲除的肿瘤细胞经 葡萄糖缺乏刺激后，p53/p21 的量并不能增加，但是在 PCAF 敲除的细胞中重新转染 PCAF （WT）或模拟 PCAF 去乙酰化修饰的PCAF （K720R）质粒却可以恢复 p53/p21 的增加。我 们通过流式细胞技术检测细胞周期的状态，结果同样表明了肿瘤细胞在缺乏葡萄糖的环 I 组蛋白乙酰转移酶 PCAF 在葡萄糖缺乏诱导肿瘤细胞周期阻滞中的机制研究 境时所发生的周期阻滞也需要 PCAF 蛋白的参与。同样地在PCAF 敲除的肿瘤细胞中过表 达 PCAF （WT）或模拟 PCAF 去乙酰化修饰的 PCAF （K720R）质粒也能恢复肿瘤细胞在缺 乏葡萄糖时诱发的G1 期阻滞，但是过表达模拟乙酰化修饰的 PCAF （K720Q）质粒并不能。 因此PCAF 蛋白在肿瘤细胞应对葡萄糖缺乏时发生的细胞周期阻滞中发挥了重要的作用。 至此，根据先前的结果和本研究结果综合来看，我们发现了一种新的 SIRT7 调控 p53 活性的机制，并且作为葡萄糖缺乏诱导肿瘤细胞发生 p53 依赖性周期阻滞的一种新的作 用机理，即 SIRT7 与 PCAF 直接相互作用并对后者发生的去乙酰化修饰促进了 PCAF 与 MDM2 的结合，进而促进MDM2 的泛素化降解，使得肿瘤细胞中的 p53 更加稳定，进而促 进了p21 的表达。葡萄糖缺乏的刺激增强了肿瘤细胞中的 SIRT7-PCAF-MDM2-p53/p21 通 路，进而使得肿瘤细胞更易阻滞在 G1 期，降低了肿瘤细胞的存活率。 关键词：SIRT7；p53；PCAF；MDM2；细胞周期