临床色谱质谱检验技术：第五章 液相色谱质谱技术（二）.pptVIP

质谱方法建立——参数优化 1、MRM模式 3.优化碰撞能量CE 2.分别输入母离子、子离子（离子对）和扫描时间 质谱方法建立——母离子和子离子的优化 Max：3.0e4 定性：401.4/365.2 Max：1.2e5 定量：401.4/383.3 接通液相，用流动注射分析(Flow Injection Analysis，FIA)优化离子源参数 喷雾针的位置 气体的流量/压力（喷雾气、辅助气、气帘气） 离子源温度 离子喷雾电压/电晕放电针电压 质谱方法建立——离子源参数优化 质谱方法建立——MRM定量方法建立 五、小节与思考 《临床色谱质谱检验技术》 质谱方法建立（离子源、质量分析器、 扫描方式、参数优化） Thanks 1、样本经过色谱分离后，通过接口依次进入质谱仪的离子源被离子化，离子在质量分析器中按质荷比（m/z）大小依次进入检测器被检测，计算机数据处理系统进行数据采集和处理，技术人员进行结果分析。 2、接口需解决的问题： （1）如何解决样品从常压下液态分子到真空下气态离子的问题（降低色谱与质谱间的工作压力差）——真空不被破坏 （2）去除流动相，保留样品，电离化合物（使分离的组分尽可能多进入MS，同时让尽量少的液体流动相进入质谱） （3）去除流动相中杂质对质谱可能造成的污染 * 离子源的性能决定了离子化效率，很大程度上决定了质谱仪的灵敏度。 MALDI优点在于使一些难电离的样品电离，且无明显的碎裂，得到完整的被分析物的分子的电离产物，特别是生物大分子。由于应用的是脉冲式激光，适合于飞行时间质谱联用。可以直接分析蛋白质酶解后多肽混合物，对样品中杂质的耐受量较大，适用于多肽、蛋白质、糖蛋白、DNA片段、多糖及其他生物技术产品的分析。 APPI是一种被分析物在气相中吸收由真空-紫外灯发出的光子（10 eV或10.6 eV）后放出电子从而离子化的过程。APPI直接将待测物电离，比较适用于非极性或弱极性化合物的分析，可以将ESI、APCI无法电离的化合物离子化，目前在药物及其代谢物分析、环境分析及有机合成等领域有一定的应用，总体来说主要还是集中在环境领域的研究。在实际临床检验分析中，ESI和APCI是应用较为广泛的LC-MS联用接口。 /HTML_News/News_7603.html /an/lcms/lcms-it-tof/397.html * APCI先将溶液引入热雾化室。雾化室通常要求有较高的温度，有助于溶剂的蒸发，提高去溶剂效果。在雾化室的尾部安装一个放电针，并加高压使之产生电晕放电，背景气离子化后与样品分子发生气相碰撞化学电离。在电离过程中，通过分子的质子化，如碱性分子带H3O+，或者电荷交换带电，酸性分子去质子化，也可以捕获电子后离子化，如卤素和芳香烃 * * 气帘气作用是减少中性分子和未雾化完全的液滴进入锥孔，可以减低噪音，提到灵敏度。 * * 样品溶液进入离子源后， 在热喷雾器的加热和雾化作用下，转化为气溶胶。然后，在加热管端有一个电晕针进行高压放电，溶剂分子被电离，充当反应气，与样品气态分子碰撞，经过复杂反应， * * PAHs：芳香烃类；Steroids：类固醇激素类；carbamates：氨基甲酸酯类；Peptide：肽类；Proteins：蛋白质 * 根据样品的极性，挥发性，热不稳定性，分子量大小 米诺地尔为降压药，是钾离子通道开放剂，能直接松弛血管平滑肌，有强大的小动脉扩张作用，使外周阻力下降，血压下降，而对容量血管无影响，故能促进静脉回流。 莫米松为糖皮质激素，具有抗炎、抗过敏等作用 * 一般ESI和APCI接口都有正负离子测定模式可供选择，建议根据文献进行选择。酸碱性不明确的可以优选APCI（+）模式进行测定。 * /p-9025756251511.html 一般情况下是含有-COOH、-OH等的物质容易去掉一个H，故容易在负离子模式下得到更多的离子；而含有-NH2等的物质容易得到一个H，故容易在正离子模式下得到 更多的离子，获得响应。碱性化合物很容易加合质子，带正电荷，形成[M+H]+ 一般ESI和APCI接口都有正负离子测定模式可供选择，建议根据文献进行选择。酸碱性不明确的可以优选APCI（+）模式进行测定。 * * * 串联四极质谱仪(MS/MS)；三重四极杆（QQQ） 三重四极杆工作原理：样品进样后首先在流动相的携带下进入色谱柱，经过色谱柱分离后，进入质谱进行检测。质谱根据被测物的质荷比（m/z）进行检测，被测物在离子源转换成气相离子进入质谱，在三重四级杆中一级质谱扫描特定范围离子或允许特定离子进入碰撞室，在碰撞室内分子离子碰撞裂解，形成子离子进入二级质谱，二级质谱扫描特定范围离子或允许特定离子进入检测器。 * 先根据化合物性质选择合适的离子化方式，以及正离子或负离子模式；DP