临床血液学检验：红细胞检验的基础方法.pptVIP

第五节 红细胞酶缺陷的检验 一、高铁血红蛋白还原试验 二、变性珠蛋白小体生成试验 三、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性检测 四、丙酮酸激酶活性检测 五、谷胱甘肽还原酶活性检测 高铁血红蛋白还原试验 原理： 用亚硝酸盐将RBC内的亚铁Hb氧化为高铁Hb。当RBC中的G6PD含量正常时，由己糖旁路形成的NADPH作为MHb还原酶的辅酶，在递氢体-美蓝参与下，可使MHb还原为亚铁血红蛋白，如果G6PD缺乏，则MHb不能还原。 本法仅能作为过筛试验，其特异性和敏感性均不高，有条件时应直接测定G6PD活性。 高铁Hb还原试验 6-磷酸G酸 G-6-PD NADP NADPH 还原型美兰 氧化型美兰 高铁Hb 亚铁Hb 高铁Hb还原酶 注：实验中首先加入亚硝酸钠将亚铁Hb氧化为高铁Hb 还原 还原 还原 H H H G-6-P 临床意义： ≥75% 正常人（脐带血≥77%） 31%~74% 中间反应型（杂合子） 30% G6PD显著缺陷（半合子或纯合子） G6PD活性检测 RBC中G6PD催化G6P变成6PG，生成NADPH，NADPH在340nm处有一吸收峰，可通过单位时间生成的NADPH的量，计算G6PD活性。 G6PD缺乏者酶活性减少。 新生儿血和网织红细胞酶活性较高。 本法试验对G6PD缺陷的诊断有较高的特异性和灵敏度，但实验方法要求严格，试剂昂贵，一般实验室不易开展。 不论何种过筛试验，其结果与发病后进行检验的时间很有关系。凡溶血期或溶血发作后几天测得G6PD活性正常者，不能排除G6PD缺乏的可能性。因为大量G6PD活性较低的衰老红细胞已被破坏，而新生的网织红细胞和年青红细胞的酶活性是正常的。最可靠的方法是在溶血发作停止后3~4月后再重复试验，即可发现G6PD缺乏。 变性珠蛋白小体生成试验 受检者血液加入适量乙酰苯肼，37℃放置一定时间，乙酰苯肼可使血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白解离成高铁血红素和变性珠蛋白，变性珠蛋白聚合成变性珠蛋白小体，附着于红细胞膜上。 煌焦油蓝染色。 本法仅能作为过筛试验。 THE END 复习题 溶血的检验方法，你能说出几种？ 铁代谢的检验，你能说几种？ 红细胞膜缺陷检验，你又能说出几种？ 在组设置中可使用此模板作为演示培训材料的起始文件。 节 右键单击幻灯片以添加节。 节可以帮助您组织幻灯片或促进多个作者之间的协作。 备注 使用“备注”节传递笔记或为受众提供其他详细信息。 演示过程中，可在“演示文稿视图”中查看这些备注。 请记住字体大小(对于可访问性、可见性、录像和联机生产都非常重要) 协调的颜色 特别注意图形、图表和文本框。 请考虑与会者将打印黑色和白色或 灰度. 运行测试打印以确保您的颜色正常，如打印纯黑色和白色 灰度. 图形、表格和图表 保持简单: 如果可能，使用一致的、非分散的样式和颜色。 标记所有图表和表格。 * 1、血管内溶血：RBC在循环血 液中直接破坏如PNH 2、血管外溶血：RBC在脾脏破 坏如球形RBC增多症、脾亢 3、原位溶血：幼RBC在骨髓中 溶血如AL、巨幼贫 血管内/外溶血比较 血管内溶血 血管外溶血 发生部位 血循环中 脾（单核-巨噬系统） 形成Hb血症 形成 不形成 获得性 后天性 先天性 发作 急性 慢性 脾肿大 无 有 溶血性贫血的分类 1、RBC内在缺陷所致的溶贫 （1） RBC膜缺陷：PNH （2）?HB结构异常：地中海贫血 （3）RBC内酶缺陷：G-6PD缺陷症 2、RBC外来因素所致的溶贫 AIHA、药物、化学因素、感染因素 溶血的检验 一、血浆游离血红蛋白检测 二、血清结合珠蛋白检测 三、血浆高铁血红素白蛋白检测 四、尿含铁血黄素试验（Rous 试验） 五、尿卟啉检测 六、红细胞寿命测定 血管内溶血的过程 血红蛋白 ①游离血红蛋白↑ 高铁血红蛋白 血红素 血红蛋白结合体 ②结合珠蛋白→ 高胆红素血症 ③血红蛋白尿 ④含铁血黄素尿 (5)尿胆原排出 肾 肝脏 胆汁 肠 血液 重吸收 粪胆原↑ 血管内溶血： ?尿:出现血红蛋白(尿潜血阳性) 或高铁血红蛋白（急性溶血） 含铁血黄素（慢性溶血） ? 血浆内出现游离血红蛋白 高铁血红素白蛋白 ?血清结合珠蛋白显著减少或消失。 血浆游离血红蛋白检测（鉴定血管内溶血的重要指标） 原理： RBC溶解后，被释放