分子生物学课件 第十一章基因治疗.pptVIP

* SCID基因治疗的方案。 在缺乏AV的情况下，AAV显示出一种潜伏的感染图案，当用AAV和AV共感染时，导致裂解感染，产生AAV粒子。 潜伏的AAV感染已被证明对在体外转导DNA到各种细胞型（无论分裂的和未分裂的细胞）都是有效的。AAV的一个重要特性是其基因组整合到人基因组中时具有高度特异性，在人染色体19q13.4-ter部位有一个单一的整合位点。 这一发现说明，AAV载体在人类基因治疗中可能被使用来进行位点特异的整合。可以说AAV具有AV基因转移的高效性和RV基因表达的持续性，而且减少了RV随机整合可能导致的危险, 因此在基因治疗研究中的应用会越来越广泛。 AAV的缺点是其转基因的装载能力。完全的病毒基因组仅有4.7 kb DNA， 插入外源DNA的长度自然也非常有限。 （三）腺相关病毒载体(Adeno-associated Virus, AAV) 图：腺病毒相关病毒载体系统 ? HSV是嗜神经组织的，有把基因转移到中枢神经系统的潜能，可能会在神经系统疾病的基因治疗中发挥作用，因而受到人们重视。 HSV基因组是长152kb的双股DNA分子。此病毒融合到神经元的膜上并被转运到核。复制周期由潜伏期和裂解期组成。在潜伏期，病毒基因组被压缩并且至少两个潜伏相关的启动子（latency-associated promoters, LAPs）被活化。 在裂解期，病毒被复制并产生病毒粒子。 （四）单纯疱疹病毒载体（Herpes Simplex Virus, HSV） HSV基因组中约30 kb的DNA可被外源DNA替代而不显著影响复制、包装和感染活力。 因此估计外源基因的最大插入为20kb或略长些）。但HSV基因组较大的尺寸使得它较难进行遗传操作。 HSV载体不能整合到宿主细胞基因组，因此表达持续的时间有一定限度。 此外，HSV基因组中包含大量功能基因，在基因治疗中使用重组HSV载体的安全水平尚待进一步观察。 5．痘病毒（Poxvirus, PV） 痘病毒在人类历史上已经广泛应用，因此使用痘病毒做为基因转移载体的安全性是勿容置疑的。 痘病毒基因组DNA长达186 kb, 推测外源基因的容量可达30 kb。 痘病毒可感染非分裂的细胞，因此可适用的细胞型比较广泛。 其缺点是不能整合入细胞基因组，故外源基因表达的时间不能持久，载体过大，受免疫系统的影响也较大。 近年来出现了更多的病毒载体,如杆状病毒、EBV、牛痘病毒、VSV 和CMV 等。 腺病毒多赖氨酸DNA复合体 2.4.5 非病毒性生物载体 （1）线粒体DNA （2）哺乳动物人工染色体（mammalian artificial chromosome, MAC) （3）人类人工染色体(human artificial chromosome, HAC) （4）人类天然小染色体(human micro chromosome, HMC) 2.5 目的基因的表达调控 2.5.1 组织特异性表达的转录调控 2.5.2 诱导性转录调控 2.5.3 增强子、静息子 2.5.4 反式激活效应 第三节 基因治疗的策略 3.1 基因修正（Gene correction） 是正常外源基因瞄准缺陷基因，通过同源重组，特异性原位修复基因缺陷，而对靶基因组不加任何改变。这是一种理想的基因治疗方法，但由于技术困难，重组率低（10-5～10-7）而应用受限。 3.2 基因修补（Gene augmentation） 也称基因增加或追加，是目前应用最多的一种可行方案。将正常外源基因导入靶细胞。如酶类、具有治疗意义的生物活性物质基因，以弥补体内缺陷的基因成分或其表达。 3.3 基因替换（Gene replacement） 用正常的基因原位替换病变细胞内的致病基因，使细胞内的DNA完全恢复正常状态。这种治疗方法最为理想，但目前由于技术原因尚难达到。 3.4 基因失活（Gene inactivation） 利用反义技术能特异性地封闭基因表达，抑制一些有害基因的表达，达到治疗疾病的目的。如利用反义RNA、核酶或肽核酸等抑制一些癌基因的表达，抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞的分化。用此技术还可封闭肿瘤细胞的耐药基因的表达，增加化疗效果。 3.5 基因添加 根据治疗的需要，可以向靶细胞输入原本没有的基因类型，改变靶细胞的细胞识别，或改变细胞内代谢途径，或通过产物调节靶基因的表达水平等等。 3.6 基因治疗的分子机理 3.6.1 免疫调节（Immune adjustment） 3.6.2 RNA干扰（RNA Interference，RNAi） 3.7 基因药物靶向治疗 基因药物是指利用基因序列数