白背飞虱三种唾液基因的功能初探.pdfVIP

摘 要 白背飞虱Sogatella furcifera (Horvath) 是水稻上重要的害虫，它不仅可以通过取食水稻韧皮 部汁液直接危害水稻，还能传播水稻黑条矮缩病毒等，对水稻的生产造成了严重的影响。 白背飞虱与水稻的取食互作中，会分泌水状唾液和胶状唾液。这两种唾液在降解植物组 织，抑制或诱导植物的防御反应中发挥着重要的作用。本实验针对白背飞虱三种唾液基因多铜 氧化酶4 （multicopper oxidase 4 ，M CO4）、黏液样蛋白 （mucin-like ）和内切-β-1,4-葡聚糖酶 （endo-β -1,4-glucanase ，SfEG1 ），研究了它们在白背飞虱取食过程中的作用以及对水稻防御反 应的诱导作用，从而为白背飞虱的防治提供参考。主要的研究结果如下： 1. 白背飞虱M CO4 基因的沉默研究。通过对白背飞虱MCO4 基因的序列分析，我们认为 MCO4 是白背飞虱的分泌蛋白，MCO4 被RNAi 沉默后，白背飞虱的存活率显著降低。与取食水 稻感虫品种TN1 相比，取食水稻抗虫品种IR26 的白背飞虱MCO4 表达量显著增加，且成虫体 重显著降低。进而推测MCO4 是取食过程的重要基因，对于白背飞虱克服水稻防御反应，完成 取食过程具有重要的作用。 2. 白背飞虱Sf EG1 基因的沉默研究。Sf EG1 基因是白背飞虱唾液腺的高表达基因。通过与 褐飞虱同源序列的比对我们获得了白背飞虱Sf EG1 基因1 430 bp 。利用显微注射法顺利沉默了白 背飞虱的Sf EG1 基因。我们发现白背飞虱在沉默Sf EG1 基因后，在TN1 水稻上的存活率显著降 低，成虫体重显著下降。蜜露量的分泌量显著减少。利用EPG 技术检测其取食行为的变化，结 果显示白背飞虱在沉默SfEG1 后取食行为受到了明显的干扰，无法顺利取食到水稻的韧皮部汁 液，且单次取食过程时常发生中断。我们利用沉默Sf EG1 基因的白背飞虱取食TN1 水稻，检测 水稻内源茉莉酸和水杨酸含量的变化，结果显示白背飞虱在沉默Sf EG1 基因后水稻内源水杨酸 的含量在6，12，24 ，48 h 时均显著低于受注射dsGFP 白背飞虱为害的对照组，而茉莉酸的含 量并未受到影响。因此Sf EG1 是白背飞虱取食的重要基因，对于诱导植物防御反应具有重要的 作用。 3. 白背飞虱mucin 基因沉默与水稻的互作研究。白背飞虱的mucin 基因对于其唾液鞘形成起 重要作用。沉默目的基因的白背飞虱取食水稻，与受注射dsGFP 白背飞虱为害的对照组相比， 水稻中内源茉莉酸和水杨酸的含量均在取食24 h 时显著低于对照组。我们推测这可能是由于 mucin 基因是白背飞虱的致死基因，取食24 h ，白背飞虱由于取食行为受到持续干扰，导致刺探 能力大大减弱，进而导致水稻防御反应减弱。 关键词：白背飞虱，多铜氧化酶4 ，内切-β-1,4-葡聚糖酶，黏液样蛋白，RNA 干扰 Ⅰ Abstract Sogatella furcifera (Horvath) is one of the most important pests of rice. It can not only damage rice by feeding the phloem juice of rice, but also transmit rice black stripe dwarf virus, which leads to heavy economic loss. In the feeding interaction between S. furcifera and rice, S. furcifera secretes watery and gel saliva. These two kinds of saliva play important roles in the degradation of plant tissue, inhibition or induction of plant defense response. In this study, three genes of multicopper oxid