黄曲霉毒素M1及赭曲霉毒素A对肠道及肾脏的联合毒性研究.pdfVIP

摘 要 黄曲霉毒素M1 （AFM1 ）是牛奶中唯一有安全限量的霉菌毒素。但是，近年来研究发现牛奶 中AFM1 与其他霉菌毒素尤其是赭曲霉毒素A （OTA ）交互存在的现象较为普遍，而这种交互存 在可能会给人类健康带来严重威胁，但AFM1 及OTA 的交互作用机制尚未明确。本研究分别利 用肠道和肾脏模型分析了AFM1 及OTA 联合导致的基因、蛋白及代谢水平的差异，以此解析两 种毒素单独及联合对肠道及肾脏功能的影响机制。 肠道黏蛋白是肠道黏液层的主要组成成分，其在维持肠黏膜稳态中起着重要作用。为此，本 研究检测了AFM1 和OTA 对Caco-2/HT29-MTX （100/0；90/10；75/25 ；0/100 ）的细胞活力、细 胞层结构及跨膜电阻 （TEER ）的影响，并分析了黏蛋白（MUC2, MUC5AC, MUC5B ）mRNA 水 平和蛋白水平的变化。主要结果如下： AFM1 及OTA 的细胞毒性具有剂量效应：单独及联合的霉菌毒素AFM1 和OTA 在低浓度下 （0.05 μg/mL ）对细胞影响较小，高浓度下（4 μg/mL ）会显著降低细胞活性及TEER 值，并显著 改变肠道黏蛋白mRNA 的表达水平和黏蛋白丰度。此外，在相同浓度下OTA 与AFM1 的毒性相 似，甚至高于AFM1 的毒性。两种霉菌毒素对肠道细胞活力和黏蛋白丰度产生的交互效应为协同 效应。而且在所有培养模型中，细胞存活率与TEER 值之间呈极显著正相关（p 0.01 ）。 OTA 的主要靶器官为肾脏。其不仅具有肾脏毒性、肝脏毒性、神经毒性和免疫毒性，还可能 会致畸、致癌、致突变，对人类健康构成严重威胁。评估AFM1 及其联合OTA 在肾脏毒性方面 的数据较少。因此，本研究利用代谢组学技术探究了AFM1 和OTA 联合对肾脏功能的损伤。主 要结果如下： 用3.5 mg/kg b.w.的毒素处理小鼠模型35 天后，与对照组相比，单独及联合的AFM1 和OTA 均显著降低了小鼠终体重，OTA 组及联合处理组显著降低了小鼠相对肾脏系数；血清生化结果的 异常也表明了小鼠肾脏的损伤；肾脏组织切片HE 染色及Masson 染色观察到小鼠肾脏不同程度 的损伤。代谢组学分析结果表明，毒素联合处理引起显著变化的代谢物及代谢通路均多于单独 AFM1 组，OTA 组与联合处理组相比无显著差异。在HK-2 细胞模型中，低毒性浓度下的AFM1 及 OTA 联合呈拮抗作用。AFM1 及 OTA 会引起溶血磷脂胆碱（LysoPC ）水平的上调，通过 SAPK/JNK 细胞信号通路导致细胞凋亡，从而造成肾脏损伤。 以上试验结果提供了单独及联合的AFM1 及OTA 损伤肠道及肾脏的有力证据。在相同浓度 下，OTA 的毒性高于AFM1 ，虽然这可能是因为各个测量指标的敏感性不一样导致的，但应引起 足够的重视。当两种霉菌毒素联合作用时，研究结果表明霉菌毒素AFM1 和OTA 存在加和、协 同和拮抗作用，其中协同作用占多数。研究结果有助于制定牛奶中霉菌毒素的最大允许限量，但 对奶及奶制品中AFM1 与其他霉菌毒素的联合作用还有待深入研究。 关键词：黄曲霉毒素M1 ，赭曲霉毒素A ，联合毒性，肠道黏蛋白，代谢组 I Abstract Aflatoxin M1 (AFM1) is the only mycotoxin in milk with specific established maximum residue limit. However, in recent years, it has been found that AFM1 in milk interacts with other mycotoxins, especially ochratoxin A (OTA), the existence of such interaction may pose a serious threat to human health, but their interaction mechanism is not clear. In this study, intestinal and renal models were used to analyze