核桃不饱和脂肪酸合成相关基因的筛选及分析.pdfVIP

摘 要 核桃是重要的木本油料树种之一，在世界范围内广泛栽种。核仁油脂含量高且富含不饱和脂 肪酸，对人体健康大有益处，受到广大消费者的青睐，其油脂品质与脂肪酸的组分和比例息息相 关。因此，探索核桃核仁脂肪酸组成及筛选相关基因对于优化核桃油脂品质具有重大意义。本研 究利用气相色谱-串联质谱 （GC-MS）法检测20份核桃资源核仁的脂肪酸组分及含量，以探究不 同品种间核仁脂肪酸组分差异。通过转录组测序技术，对 ‘中核丰’不同发育时期核仁进行基因 差异表达分析，以期筛选核桃不饱和脂肪酸合成的关键基因。主要内容与结果如下： 1. 以20 份核桃资源的成熟期核仁为试材，对不同品种核仁的脂肪酸组分及含量进行分析。 结果表明：20 份核桃资源核仁中均检测到4 种主要脂肪酸，分别为亚油酸、油酸、硬脂酸和棕榈 酸，不饱和脂肪酸含量高达90%，其中亚油酸含量最高，油酸含量次之，且二者含量呈极显著负 相关 （P＜0.01）。不同品种间脂肪酸组分存在差异，20份核桃资源核仁脂肪酸组分中油酸的变异 系数最大，为19.98%，亚油酸的变异系数最小，为9.89%。 2. 以筛选到的高油酸品种 ‘中核丰’为试材，对其核仁进行转录组测序及分析。结果表明， ‘中核丰’不同发育时期核仁不饱和脂肪酸合成相关基因在转录水平上存在差异。通过差异基因 富集分析，共挖掘到16个核桃不饱和脂肪酸合成相关基因，包括4 个ACCase 同源基因 （WALN UTRA, WALNUTRA, WALNUTRA, WALNUTRA）、1 个MCAT 同源基因 （WALNUTRA）、3个KAS 同源基因 （WALNUTRA, WA LNUTRA, WALNUTRA）、1个LACS9 同源基因 （WALNUTRA）、 1个FATA 同源基因 （WALNUTRA）、1个FATB 同源基因 （WALNUTRA）、3 个SAD 同源基因 （WALNUTRA, WALNUTRA, WALNUTRA）以 及2 个FAD2 同源基因（WALNUTRA, WALNUTRA）。其中SAD 的同源基因 WALNUTRA 以及FAD2 的同源基因WALNUTRA 为典型的脂肪酸合成基因， 被广泛研究报道。同时荧光定量PCR 验证了转录组结果。 3. 选择SAD （WALNUTRA）和FAD2 （WALNUTRA）2 个基因进行克 隆及分析。结果显示：核桃SAD （WALNUTRA）所编码的氨基酸序列与山核桃、芝麻 SAD 编码的氨基酸序列相似性最高；核桃FAD2 （WALNUTRA）所编码的氨基酸序列 与大豆FAD2 编码的氨基酸序列相似性最高。亚细胞定位结果显示核桃SAD 主要定位于细胞质和 细胞核，FAD2 定位于细胞质。 关键词：核桃，不饱和脂肪酸，转录组测序，SAD，FAD2 I Abstract Walnut (Juglans regia L.), one of the most important woody oil-bearing tree species, has been widely cultivated in the world. Walnut has high oil content with rich unsaturated fatty acids which are beneficialtohuman health and are favoredby consumers.The composition andproportion of fatty acids are closely related to walnut oil quality. Therefore, the optimization of walnut oil quality is of great significance for w