ZmmiR169q在玉米应答盐胁迫中的作用及机制研究.pdfVIP

摘 要 玉米是全球范围内重要的粮食、饲料和工业原料作物，土壤盐碱化极大地影响了玉米的生长 和最终产量，miRNAs 是植物生长发育和逆境应答过程的关键调控因子，但miRNAs 参与玉米高 盐应答的研究还很少。本研究前期鉴定了一个玉米根中对盐胁迫敏感的 miR 169 家族成员 ZmmiR 169q，初步分析表明，ZmmiR 169q 参与了调控玉米对盐逆境的应答。在前期基础之上， 深入研究了ZmmiR 169q 调控玉米盐应答的分子机制，主要取得以下结果： 1. 对pmiR169q:GUS 转基因植株进行GUS 染色分析，发现在200 mM NaCl 处理1 h 时，根中 ZmmiR 169q 表达量降到最低，4 h 后逐渐升高，表明ZmmiR 169q 可能是玉米根中的一个盐 应答信号。 2. ZmmiR 169q 沉默的转基因玉米株系（MIM169q ）对200 mM NaCl 表现很强的耐受性，而 ZmmiR 169q 过表达株系（ZmmiR169q OE ）则对200 mM NaCl 很敏感，表现出极不耐盐的表 型，表明ZmmiR169q 对玉米植株耐盐性具有负调控作用。 3. ZmmiR169q OE 株系及WT 植株的根部转录组分析表明，ZmmiR169q 可能参与高盐诱导产 生的氧化胁迫。进一步用1mM H O 处理玉米野生型B73 ，qPCR 分析表明ZmmiR169q 能够 2 2 对氧化胁迫迅速应答，在处理1 h 时快速下调，2 h 时丰度降到最低，4 h 时开始上升，与盐 应答趋势完全一致。经同样处理的pmiR169q:GUS 转基因植株，GUS 染色也获得相同结果。 4. 前期证实ZmmiR169 可以靶向降解ZmNF-YA14 mRNA ，对pmiR 169q:GUS 和pNF-YA14:GUS 转基因植株初生根进行切片和GUS 染色分析，发现二者均在根部皮层和内皮层中特异表达； 进一步 qPCR 分析表明 ZmmiR169q OE 株系中 ZmNF-YA14 的表达水平则显著下调，说明 ZmmiR169q 调控了玉米根中ZmNF-YA14 的表达。同时盐处理结果显示，ZmNF-YA14 OE 比 野生型表现出更强的盐耐受性，存活率均显著高于对照，与ZmmiR169q OE 株系表现相反， 证实了ZmmiR169q 是通过调控ZmNF-YA14 来参与玉米对高盐胁迫的应答。 5. 通过DAB 和NBT 染色分析表明，在正常和盐胁迫条件下，ZmmiR169q OE 株系中均积累比 对照更多的H O 和O - ，而ZmNF-YA14 OE 中二者的累积均降低。同时检测了盐胁迫下不 2 2 2 同株系中MDA 的浓度，发现具有高ROS 水平的ZmmiR169q OE 株系根中积累了比对照更 多的MDA ，而低ROS 水平的ZmNF-YA14 OE 根中MDA 的浓度则低于对照，说明ZmNF-YA14 上调表达能减轻ROS 积累对植物细胞造成的损伤。 6. 测定盐胁迫下不同玉米株系根中抗氧化酶SOD，CAT 和POD 的活性，结果显示，ZmNF-YA14 OE 根中三种酶活性均显著高于对照，ZmmiR169q OE 则呈相反趋势。表明提高根中 ZmNF-YA14 的表达水平，会提高植物体内ROS 清除酶系的活性，从而清除过量ROS 减轻对 细胞的损伤。 7. ZmNF-YA14 OE 和WT 根转录组分析表明，ZmNF-YA14 OE 中差异表达基因GO 分析主要富 集于四吡咯结合活性和抗氧化活性相关途径，进一步分析发现了一个在ZmmiR169q OE 中显 著下调，而ZmNF-YA14 OE 中显著上调表达的基因，其编码一个玉米过氧化物酶 1 蛋白， 命名为ZmPER1 ，qPCR 验证了转录组的结果，ZmPER1 随ZmNF-YA14 mRNA 的积累而增加， 说明ZmPER1 可能在玉米根中受ZmNF-YA14 的正向调控。 I