高分子量小麦谷蛋白亚基[宣讲].pptVIP

②分子筛效应 由于凝胶具有黏度和较高摩擦阻力，以及其网络结构直接参与了移动颗粒的分离过程，这种区别不同大小分子种类的能力就是凝胶所具有的一种筛分能力即分子筛效应。 ③浓缩效应 蛋白质样品中的各组分在浓缩胶中会被压缩成层，而使原来很稀的样品得到高度浓缩。 * 精品PPT | 借鉴参考 ● 实验材料、药品和器材 实验材料：小麦籽粒，小麦普通中国春和马奎斯为对照 实验器材：离心机、电泳仪、电泳槽、梳子、制胶架、成像 仪、研钵、振荡器、微波炉、天平、pH计、移 液器、微量进样器、染色盘、摇床、量筒等。 实验药品：丙烯酰胺、N,N-甲叉双丙烯酰胺、N,N,N,,N,-四 甲基乙二胺、过硫酸铵、二硫苏糖醇、甘氨酸、 甘油、十二烷基硫酸 钠、考马斯亮蓝等。 * 精品PPT | 借鉴参考 试剂配制： ①麦谷蛋白提取液：4g SDS + 1g DTT + 250 ml 0.5M Tris-HCl (PH = 6.8)+ 20 ml甘油 + 30 mg溴酚蓝 + 蒸馏水定溶至 100 ml。 ②10×电极缓冲液：Tris-HCI 30.3 g + 甘氨酸 144 g + SDS 10 g + 蒸馏水定溶至 1000ml。 ③30%丙烯酰胺：30 g + 蒸馏水定溶至 100ml。 ④2%甲叉双丙烯酰胺：2 g + 蒸馏水定溶至 100ml。 * 精品PPT | 借鉴参考 ⑤ 1 M Tris-HCI（ PH = 6.8）: 12.1g Tris + 蒸馏水定 溶至 100ml,用1 N HCI 调 PH = 6.8。 ⑥ 3 M Tris-HCI（ PH = 8.8）: 36.3g Tris + 蒸 馏水定溶至 100ml,用1 M HCI 调 PH = 8.8。 ⑦ 10% SDS：SDS 10g + 蒸馏水定溶至100ml。 ⑧ 10% 过硫酸铵：1g过硫酸铵 + 蒸馏水定溶10ml。 ⑨ 染色液：100mg G-250 + 12 g三氯乙酸 + 蒸馏水定溶至200ml。 * 精品PPT | 借鉴参考 ● 实验操作步骤 1、小麦谷蛋白提取程序 ①取单粒小麦种子研磨成粉，转入离心管中，加入适量的蛋白质提取液，在旋涡振荡器上混合均匀； ②将离心管放入65℃水浴锅中水浴45min后取出离心管放，室温冷却； ③将冷却后的离心管12000转/min离心30min，保存于 4℃ 冰箱备用。 * 精品PPT | 借鉴参考 2 电泳程序 ①封板：利用1%琼脂封板，以防玻璃板漏胶； ②凝胶配制：见表 1。 ③ 制胶：按表1的配方分别配制 8% 和 15% 两种分离 胶，然后用两个取液器进行以下操作，先吸取1.0ml已经 混匀的 15% 分离胶，加到玻璃板之间，再向 15% 分离 胶中加入 8% 的分离胶0.5ml ，充分混匀后，从中吸取 1.0ml加到玻璃板之间，如此反复操作上述步骤， * 精品PPT | 借鉴参考 直至距玻璃板上缘约 3cm 处时，向胶面上加一层正丁醇，静置，直至分离胶凝固。倒置胶板，流出正丁醇，用蒸馏水冲洗胶面，用滤纸吸尽多余水。 按表1配制5%浓缩胶，混匀后倒入玻璃板之间，将梳子放置在玻璃板间，注意不要产生气泡，静置至胶凝。待浓缩胶凝固后，垂直取出梳子，加蒸馏水，甩出样品槽中的残胶。 * 精品PPT | 借鉴参考 成 分 8%分离胶50ml 15%分离胶50ml 5%浓缩胶10ml H2O 23.2 11.5 6.8 30%Acr 13.3 25.0 1.7 1M Tris-HCl (pH8.8) 12.5 12.5 1M Tris-HCl (pH6.8) 1.25 10%SDS 0.5 0.5 0.1 10%AP 0.5 (0.25) 0.5 (0.25) 0.1 TEMED 0.03 (0.02) 0.02 0.01 表1 分离胶与浓缩胶配方 成 分 8%分离胶50ml 15%分离胶50ml 5%浓缩胶10ml H2O 23.2 11.5 6.8 30%Acr 13.3 25.0 1.7 1M Tris-HCl (pH8.8) 12.5 12.5 1M Tris-HCl (pH6.8) 1.25 10%SDS 0.5 0.5 0.1