生物化学教学课件：11 Replication(111-5).pptVIP

Chapter 11   DNA Replication and Repair 要求 1. 掌握遗传信息传递的中心法则 2. 掌握DNA复制的一般规律：DNA半保留复制、半不连续复制 3. 了解大肠杆菌DNA聚合酶的催化特性，原核生物DNA的复制过程 4. 了解引起DNA损伤的因素，DNA损伤的修复机制 中心法则 中心法则 第一节 DNA的复制 一、DNA半保留复制 1958年，Meselson和Stahl用15N标记E.coli.DNA，证明了DNA的复制是半保留复制。即每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的。 ① 半保留 ② 全保留 ③ 随机保留（如果是这两种复制方式， 实验将结果如何） Semi-conservative replication 复制中的大肠杆菌染色体 复制起点的确定 复制的方向 复制方式-1 复制方式-2 复制方式-3 DNA replication 二、DNA合成反应 生物合成5’→3’ ，化学合成3’→5’ 1．反应必备条件 ⑴ DNA模板(反转录时用RNA模板) ⑵ 引物 (DNA、RNA或蛋白质) ⑶ DNA聚合酶 ⑷ 4种dNTP ⑸ Mg2+ DNA链的延长反应 3．几种由DNA聚合酶催化的DNA合成反应 三、与DNA复制有关的酶及蛋白质 有30多种酶及蛋白质参与DNA复制 1．原核DNA聚合酶（E.coli.） ⑴ E. coli. DNA pol. I 单体酶，分子量103000，含一个Zn2+，每个细胞中含400个DNA pol.Ⅰ 催化活性：5’ 3’ 聚合活性 3’ 5’ 外切活性 5’ 3’ 外切活性 大肠杆菌DNA复制起点 复制的起始 真核生物在快速生长时，可采用更多的复制起点同时复制。如黑腹果蝇，早期胚胎细胞中相邻复制起点的平均距离为7.9kb，而在培养的成体细胞中，平均距离为40kb，成体细胞只利用一部分复制起点。 复制时组蛋白的分布 第二节 DNA的损伤及修复 紫外线可使DNA分子中同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶碱基之间形成二聚体（TT），两个T以共价键形成环丁烷结构。CT、CC间也可形成少量二聚体（CT、CC），使复制、转录受阻。 胸腺嘧啶二聚体 光修复 重组修复 第三节 RNA指导DNA的合成 反转录（reverse transcription） 以RNA为模板合成DNA 与转录过程遗传信息传递方向相反 1970年，Temin和Baltimore分别从致癌RNA病毒中发现发反转录酶 放线菌素D（抑制以DNA为模板的反应，复制和转录）能抑制致癌RNA病毒的复制，可见致癌RNA病毒的复制过程必然涉及DNA。 Bader用嘌呤霉素（puromycin）来抑制静止细胞蛋白质的合成，发现这种细胞仍能感染劳氏肉瘤病毒（RSV），证实反转录酶是由反转录病毒带入细胞的。 反转录病毒 2．反转录病毒的生活周期 HIV-1（Human immunodeficiency virus） 第四节 DNA合成技术 一、cDNA合成 1. cDNA文库的构建 cDNA：以mRNA为模板，用反转录酶合成第 一链，去除mRNA，合成第二链。 cDNA文库是获得真核结构基因的最好方法， 成熟的mRNA无内含子。 取代合成法 二、病毒RNA的反转录 反转录病毒（retrovirus）基因组由两条相同的（+）RNA链