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正交设计法优化超声破壁提取麦冬 皂昔D的工艺研究 【摘要】 目的通过观察麦冬细胞 超声破壁时间和利用紫外分光光度法检测 超声提取麦冬皂昔D含量两种考察指标来比 较筛选麦冬皂昔D的提取条件，优化超声提 取工艺。方法采用正交设计法，分别以麦冬 细胞破壁时间和采用紫外分光光度法测定 麦冬细胞破壁后皂昔 D的含量为考察指标， 考察乙醇浓度、温度、麦冬粒度和先期浸泡 时间等因素对超声提取工艺的影响。 通过显 微镜观察，确定细胞破壁状况；通过对两种 考察指标的实验结果进行比较， 优化提取方 案。结果利用紫外分光光度法测定麦冬皂昔 D含量和通过观察麦冬细胞破壁所筛选的麦 冬皂昔D最佳提取工艺的结果是一致的。在 考察因素中，麦冬皂昔提取工艺影响程度为： 粒度〉乙醇浓度〉先期浸泡时间 温度， 超 声提取最佳条件为：温度45 C , 80目粒度， 95%乙醇，先期浸泡12 ho结论通过超声方 法对中草药有效成分进行提取， 其提取率与 细胞破壁有关，利用正交实验分析紫外分光 光度法检测麦冬皂昔D含量和考察麦冬细胞 破碎的结果是一致的，可通过观察麦冬细胞 破壁结果来优化提取工艺，简化操作。 【关键词】 超声；细胞破壁；麦冬皂昔D; 正交设计法；工艺筛选 麦冬 Ophiopogon japonicusKer-Gawl [1]为百合科沿阶草属植物，是常用滋阴 中药，其味甘微苦，性微寒，归心、肺、胃 经，具有养阴润肺、益胃生津、清心除烦的 功效，传统中医主要将其用于肺、胃、心阴 不足的病症。 中草药中许多有效成分为细胞内成分， 提取时需要破碎细胞壁，而现有的化学和机 械方法破碎细胞很难起到理想的破碎效果 ：2]，影响提取率。超声提取包括机械粉碎、 热学及空化作用:3, 4],由于3个方面的 综合作用，加速了细胞的破碎，提高了有效 成分的提出率。采用超声方法提取中草药中 有效成分的文献已有很多 [5?11],但通 过超声方法考察细胞壁破碎情况与提取效 率的关系尚未见文献报道。本实验米用正交 设计法，分别以麦冬细胞破壁时间和采用紫 外分光光度法测定麦冬细胞破壁后皂昔 D的 含量为考察指标，考察了乙醇浓度、温度、 麦冬粒度和先期浸泡时间等因素对超声提 取工艺的影响，通过显微镜观察确定细胞壁 破碎状况；通过对两种考察指标实验结果的 比较，优化提取方案。 1仪器与材料 UI2550 SHIMADZUK外分光光度计； KQ5200嗖超声波清洗仪； Olympus X 40细 胞生物显微镜；RT-5型中药粉碎机；BS224S 型电子分析天平。 麦冬，购自河北安国中药市场，产于四 川，经鉴定本品为百合科沿阶草属植物麦冬 的干草块茎；麦冬皂昔 D标准品；高氯酸。 2方法与结果 正交实验设计及各因素水平设定选取 溶液温度、麦冬粒度、乙醇浓度和浸泡时间 为主要考察因素，各因素的水平设定见表 1。 正交实验米用 L9正交表[12],见表2。 表1超声破碎提取麦冬皂昔 D实验水平 超声对麦冬细胞破壁的影响称取过 80 目筛麦冬粉末g ,加入100 ml 95% 乙醇， 先期浸泡12 h,在45 C条件下，超声30 min 后，显微镜下观察其超声前后细胞壁变化情 况。结果表明，超声能使麦冬细胞壁破碎。 标准曲线的绘制精密称取麦冬皂昔 D mg置于100 ml容量瓶中，用甲醇溶解， 定容，精密吸取，，，，，，，ml标准溶液置于 具塞试管中，挥干溶剂，加高氯酸 10 ml , 密塞，于60 C水浴加热15 min,冰水浴冷 却，终止反应，以高氯酸作为空白对照，在 295 nm和313 nm波长处测其吸收值。以浓 度C对吸收差值作图，得到麦冬皂昔 D 的标准曲线方程为△ A= C+,相关系数为1。 线性范围为? mg?L-1。 重复性实验称取过80目筛麦冬粉末g, 放入具塞三角瓶中，用100 ml的95%Z.醇溶 液浸泡12 h。浸泡后在45 °C恒温下，超声 波振荡提取1 h ,将提取液进行抽滤。然后 将滤液移入旋转蒸发器中蒸发至干。 向瓶中 加入5 ml的高氯酸，密塞，60 C水浴加热 15 min,冰水终止反应，以高氯酸作空白对 照，进行紫外分光度检测。重复进行 6次， 所得结果RSD=%表明重复性良好。 超声破壁提取麦冬皂昔 D正交实验结果 将麦冬药材粉碎，过筛，得到 80, 40, 20 目麦冬粉末。分别称取麦冬粉末适量，用100 ml溶剂浸泡一定时间，在一定温度下进行超 声破碎，每隔5 min取样，显微镜观察，确 定细胞破壁时间。将提取液抽滤，滤渣用少 量蒸储水冲冼，然后将滤液移入旋转蒸发器 中蒸发至干；向瓶中加入 5 ml的高氯酸， 密塞，60C水浴加热15 min ,冰水终止反应， 以高氯酸作空白对照，采用紫外分光光度法 检测。 分别米用极差法和方差分析法对正交 实验的