黄酮的提取方案.docxVIP

黄酮提取实验方案 1材料与仪器 1.1材料 1.2试剂 芦丁，无水乙醇，氢氧化钠，石油醚，硝酸铝，三氯化铁，三氯化铝，浓氨水，浓盐酸，镁粉， 亚硝酸钠(以上均为国产分析纯)，实验所用水均为蒸馏水。 1.3实验仪器 电热恒温水浴锅 电子天平(感量 0.0001g) 722型光栅分光光度计 索氏提取器 量筒(100ml,10ml)25ml比色管 移液管 小试管 白瓷板 圆底烧瓶 100m 容量瓶 锥形瓶 2实验原理 2.1提取原理 溶剂提取原理 游离黄酮黄酮昔 备注 乙辱 溶解范围广 + + (甲醇)著■甘元均可溶(90-95%) (6M)甲醇毒性大 沸水 多糖昔易于水 + 成本低、安全, 水溶性杂质多 臓性水或 稀氢氧化钠溶出能力强 碱性乙醇酚强基的酸性 + +石灰水除杂质效果好 分离依据之间的极性（分配系数K）差异分离工艺回收回收单糖瞽多糖昔誓元爸游离黄酮的乙瞇液黄酮与杂质 昔与昔元 昔元与昔元）溶剂萃取法2.2分离方法及原理（二）pH梯度萃取法分离依据： 分离依据 之间的极性（分配系数K）差异 分离工艺 回收 回收 单糖瞽 多糖昔 誓元 爸游离黄酮的乙瞇液 黄酮与杂质 昔与昔元 昔元与昔元 ）溶剂萃取法 2.2分离方法及原理 （二）pH梯度萃取法 分离依据： 游离黄酮类化合物的酸性差异（见黄酮酸性规律） 分离工艺： 依次以 5%NiiH0h . 5%Na2C0 0. 2%NslOH. 4%NaOH^取 5%NaHCO3 5%Na2CO3液 0. 2KNaOH液 4%NaOH液 母液 （脂溶性杂质） 旧黄酮 石油駆液 乙豔液 乙酸乙酯 （脂溶性杂质）| | 丄酸化 丄 I I 7, 4^ -OH黄酮 7或卩-OH黄酮一叢-OH黄酮 J 水饱和正丁醇 母液 （水溶性杂质） 减压回收 原料的提取苹缩液（水溶液） 依次以石油耿、乙馳、 乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取 3 实验部分 原料的预处理 金星科厥类叶T除杂T水洗T晾干T粉碎 芦丁—标准溶液的配制 将芦丁在干燥箱里用 120C条件下恒重1.5h,然后精确称取芦丁标准品 O.OIg用85%勺乙醇溶 液配制成 100.00mL 的溶液，备用。 测定波长勺选择 精确移取芦丁标准溶液 0.50mL, 置于 25.00mL 勺比色管中，用质量分数为 85%勺乙醇稀释到 10.00mL处，加人5%勺亚硝酸钠溶液 0.80mL,混匀，放置10min;加入10%硝酸铝溶液0.80mL ,混匀， 放置 10min, 再加入 4%勺氢氧化钠溶液 10.00mL, 混匀，放置 10min, 加入 85%勺乙醇溶液至刻度，摇 匀，10min后在460?560nm处测定吸光度，⑷（以试剂样品做空白）选择最大吸收波长。 芦丁标准曲线勺绘制 精确吸取芦丁标准溶液 0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于 6支25.00mL的比色管中， 用质量分数为 85%勺乙醇稀释到 10.00mL 处，加人 5%勺亚硝酸钠溶液 0.80mL, 混匀，放置 10min; 加 入 10%硝酸铝溶液 0.80mL , 混匀，放置 10min, 再加入 4%的氢氧化钠溶液 10.00mL, 混匀，放置 10min， 加入85%勺乙醇溶液至刻度，摇匀， 10min后于波长500nm处测定吸光度，（以第一瓶为空白溶液） 然后以吸光度和芦丁溶液浓度做图，绘制标准曲线。 黄酮类化合物勺特征性实验 [5]-[6] 在一定条件下对提取勺黄酮类化合物进行特征性实验，具体内容如下： （1）盐酸一镁粉反应：取 1.00mL提取液于试管中加适量镁粉摇匀，再加入浓盐酸数滴（ 1次 加入），观察其泡沫颜色。 （ 2） 三氯化铝反应：取提取液点在滤纸上，滴加 1%三氯化铝乙醇溶液， 吹干，观察颜色变化。 （ 3） 三氯化铁反应：取几滴提取液于白瓷板上，滴加 1%三氯化铁乙醇溶液， 观察其颜色。（ 4） 浓氨水反应：取乙醇提取液点在滤纸上，将滤纸在浓氨水上方熏 0.5min ，观察 其颜色变化。 单因素实验 较佳提取剂质量分数勺确定 准确称取 3g 处理好勺金星厥科叶样品置于圆底烧瓶中，分别用无水乙醇 、 95%、 85% 80%、 75%的乙醇60mL对3g金星厥科叶样品在水浴温度为 80C下回流提取3h.提取完毕，用与提取剂的 质量分数相同勺乙醇反复洗涤圆底烧瓶、滤纸包，将其定容于 100:00mL 容量瓶中，然后精确吸取 0.50mL提取液置于25.00mL的比色管中，用与提取剂质量分数相同的乙醇稀释到 10.00mL处，加人 5%的亚硝酸钠溶液 0.80mL, 混匀，放置 10min; 加入 10%硝酸铝溶液 0.80mL , 混匀，放置 10min, 再 加入 4%的氢氧化钠溶液 10.00mL, 混匀，放置 10min