2020基因工程基本操作的四个步骤.pptVIP

基因工程基本操作的四个步骤 1 、目的基因的获取 2 、基因表达载体的构建 3 、将目的基因导入受体细胞 4 、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1 、目的基因主要是指 ______________________ 编码蛋白质的结构基因 2 、获取目的基因的常用方法有哪些 ? （ 1 ）从基因文库中获取 （ 2 ）利用 PCR 技术扩增 （ 3 ）人工合成 请阅读 P9 第一和二两段 ( 一 ) 从基因文库中获取目的基因 ? 将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片断，导入到受体菌的群体中， 各个受体菌分别含有这种生物的不同基 因，称为 基因文库 基因文库 基因组文库 （ 某物 种全部基因 ） 部分基因文库 （如 :cDNA 文库） 1. 基因文库 2. 基因文库的构建方法与目的基因的获得 ① 鸟枪法： 供体细胞中的 DNA 许多 DNA 片段 运载体 限制酶 与载体连接载入 受体细胞 （基因组文库） 产生特定性状 导入 外源 DNA 扩增 目的基因 分离 ( 直接分离法 ) ( 一 ) 从基因文库中获取目的基因 ② 反转录法： 以目的基因转录成的 信使 RNA 为模板，反转录 成互补的单链 DNA ，然后 在酶的作用下合成双链 DNA ，从而获得所需的基 因。 目的基因的 mRNA 杂交双链 ( 单链 RNA/ 单链 DNA) 单链 DNA 反转录酶 核酸酶 H 2. 基因文库的构建方法 与目的基因的获得 DNA 聚合酶 双链 DNA( 目的基因 ) （ cDNA 文库） ③ 根据已知的氨基酸序列合成 DNA 法 ： 根据已知蛋白质 的氨基酸序列，推测 出相应的信使 RNA 序列， 然后按照碱基互补配 对原则，推测出它的 结构基因的核苷酸序 列，再通过化学方法， 以单核苷酸为原料合 成目的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA 的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 2. 基因文库的构建方法 与目的基因的获得 上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 优点 缺点 鸟枪法 反转录法 根据已知氨基 酸合成 DNA 法 操作简便 广泛使用 工作量大，盲目， 分离出来的有时并 非一个基因 专一性强 操作过程麻烦， mRNA 很不稳定，要 求的技术条件较高 专一性最强 仅限于合成核苷酸 对较少的简单基因 思考 : 为什么要构建基因文库 ? 直接从含有目的基因的生物 体内提取不行吗 ? PCR 技术 — 聚合酶链式反应 ? 概念： ? 原理： ? 前提： PCR 扩增仪 DNA 双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 是一项在生物 体外 复制 特定 DNA 片段 的核酸合成技术 四种脱氧核苷酸 dNTP 一对引物 热稳定 DNA 聚合酶 (Taq 酶） 模板 DNA ( 含有目的基因 ) 温度控制 ? 条件： ④方式 ：以 _____ 方式扩增，即 ____ （ n 为扩增循 环的次数） ⑤结果 ： 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 指数 2 n ⑥过程： a 、 DNA 变性（90℃ - 96℃）：双链 DNA 模板 在热作用下， _____ 断裂，形成 ___________ b 、退火（ 复性 55℃ - 60℃）：系统温度降低，引 物与 DNA 模板结合，形成局部 ________ 。 c 、延伸（70℃ - 75℃）：在 Taq 酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的 ________ 。 氢键 单链 DNA 双链 DNA 链