生物化学：02蛋白质化学1.pptVIP

羧肽酶法 羧肽酶（carboxypeptidase ）：作用于肽链的游离羧基末端释放单个氨基酸。 羧肽酶 A: 除 Lys , Arg , Pro， Pro ( -2 ) 羧肽酶B： 水解 Arg , Lys , 非( Pro -2 ) 肽链的拆分 非共价键：变性剂 共价键：二硫键 过甲酸氧化法 还原法 肽链的部分水解 化学法：溴化氰（CNBr）法 酶法：胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 胃蛋白酶 溴化氰（CNBr）裂解法 肽酰高丝酸内酯 专一水解甲硫氨酸羧基形成的肽键 胰蛋白酶Trypsin Lys-Pro Arg-Pro 胰凝乳蛋白酶/糜蛋白酶（chymotrypsin）：芳香族氨基酸的羧基端 ( Phe，Tyr， Trp ，不与Pro相连) 胃蛋白酶（pepsin）：断裂键的两端均为疏水氨基酸( Leu-Val) 胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶/糜蛋白酶 嗜热菌蛋白酶 胃蛋白酶 弹性蛋白酶 内肽酶 片段重叠法 N -A-B-C-D-E-F-G-H-M-N- C ↑ ↑ ↑ ↑ 酶1 A-B-C-D E-F-G H-M-N 酶2 A-B-C D-E-F G-H-M-N 二硫键的定位 ——对角线电泳 过甲酸 练习 12肽 胰蛋白酶水解： Phe-Ala-Lys，Ser-Glu-Asn， Ala-Ile-Tyr-Met-Gly-Arg 胰凝乳蛋白酶水解： Met-Gly-Arg-Phe，Ala-Ile-Tyr， Ala-Lys-Ser-Glu-Asn Ala-Ile-Try- Met-Gly-Arg-Phe-Ala-Lys-Ser-Glu-Asn 肽链完全水解： Met，Pro，Phe，Glu，2xLys，NH3 FDNB：DNP-Phe CNBr：2肽高丝氨酸内酯，4肽 胰蛋白酶：2 x 3肽 羧肽酶A、B均阴性 →Gln →N-Phe →N-Phe-Met →N-Phe-Met-Lys →Pro-Lys-C/ Lys-Pro-C Phe-Met-Lys-Gln-Pro-Lys Phe-Met-Lys-Gln-Lys-Pro 1.一氨基酸溶于水，溶液pH为5，氨基酸pI大于、小于或等于5？ 正离子 pHpI 两性离子 pH=pI 负离子 pHpI pI5； 2.用阳离子交换树脂分离Asp和Lys，用pH7.0缓冲液洗脱，哪个氨基酸先被洗脱下来？ 阳离子交换树脂 pIAsp= 2.97，pILys= 9.74 pH=7.0，Asp-；Lys+ 6 mol盐酸溶液中将蛋白质在110t加热大约20h； 6 mol NaOH * 脂肪烃侧链氨基酸：甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸 芳香环氨基酸：苯丙氨酸，色氨酸 亚氨基酸：脯氨酸 含硫氨基酸：甲硫氨酸 * 较非极性R基氨基酸易溶于水，侧链含不解离极性基（羟基，酰胺基，巯基）可与水成氢键。 * 生理pH 精氨酸：胍基；组氨酸：咪唑 氨基酸中既有酸性的羧基，又有碱性的氨基，故常以内盐形式存在，熔点较高 蛋白质溶液280nm的光吸收值主要由色氨酸、酪氨酸产生。 茚三酮是一个有机化合物，被广泛用于检测氨、一级和二级胺，尤其是氨基酸。 －NH3是弱酸，完全解离时PH为11－12或更高，若用碱滴定－NH3所释放的H＋来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点。常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使－NH3释放H＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。 石蕊变色范围是pH 5.0～8.0 ;酚酞的变色范围是pH 8.0～10.0。 * 烃基化反应,Sanger蛋白质N端分析 * 烃基化反应,PTC-苯氨基硫甲酰: PTC-苯氨基硫甲酰 * 酰化反应 * 蛋白质人工 * 20AA→20肽, 2x1018 肽抗生素是生物界中广泛存在的一类具有一定生物活性的肽，一般具有抗细菌或真菌的作用，有些还具有抗原虫、病毒或癌细胞的功能。从短小杆菌中分离.属于此类的抗生素有粘菌素、多粘菌素B、杆菌肽、维吉尼亚霉素、持久霉素、硫肽霉素、蜜柑霉素及阿伏霉素等。多数肽抗生素对革兰氏阳性菌有较强的杀菌作用，个别则对革兰氏阴性菌和绿脓杆菌有作用。其作用机制包括干扰细菌细胞膜或蛋白质合成功能。其结构复杂，作用机制缺乏特异性，故细菌难以产生耐药性，且与其他类抗生