2020细菌感染的实验室诊断.pptVIP

I M Vi C 试验 大肠埃希菌 + + - - 产气杆菌 - - + + （ 5 ） 分装 ? 平板：灭菌后冷却至 50 ℃ ~ 60 ℃时倾倒 90mm 25~30ml （ 4mm ）： 药敏用 90mm 13~15ml ( 3mm ) ： 培养用 ? 琼脂斜面：分装量为试管的 1/4~1/3 ，灭菌后 趁热制成斜面，斜面长度 2/3 ? 高层、半固体、液体：分装量为试管长度 1/4~2/3 （ 6 ） 灭菌 ? 高压蒸汽灭菌 ? 无糖： 103.4kPa 121.3 ℃ 15~30min ? 含糖： 68.4kPa 115 ℃ 15min ? 流动蒸汽灭菌法 血清、牛乳、鸡蛋 ? 间歇蒸汽灭菌法 （ 7 ） 鉴定 ? 无菌试验 ：将制好的培养基在 35 ℃孵育过 夜，判定是否灭菌合格。 ? 效果检查 ：按不同的培养要求，接种相应菌 种，观察细菌的生长状况，判断培养基是否 符合要求。 （ 8 ） 保存 4 ℃冰箱保存，一周左右 注意事项 1. 器皿 中性硬质玻璃器皿 2. 化学药品 化学纯以上 3. 准确称量，正确溶解 4. 准确测定培养基酸碱度 5. 保持澄清 6. 灭菌时间不宜过长，不宜反复灭菌 二、分离培养 （一）细菌的分离 1. 无菌技术 是防止微生物进入物品和机体，同时防止 被检物中可能存在的病原微生物污染周围 环境及工作人员的规范化操作技术。 2. 操作要点 左手 负责持平皿、试管等物品 右手 持接种工具取菌并划种 3. 移种或接种的基本步骤 （ 1 ）右手持接种工具，在火焰上烧灼灭菌。 （ 2 ）左手拿起标本盒或平皿、试管等。 （ 3 ） 用接种工具挑取适量标本或细菌。 （ 4 ）根据目的选择不同的接种方法 （ 5 ） 接种完毕，在火焰上烧灼接种工具，放 回原处。 4. 常用的接种方法 （ 1 ） 平板划线法 ? 分区划线法 用于杂菌量较多的标本 ? 连续划线法 用于杂菌不多的标本 （ 2 ） 琼脂斜面接种法 — 纯培养 （ 3 ） 穿刺法 — 观察细菌动力 （ 4 ） 液体培养基接种法 — 增菌 （ 5 ） 倾注平板法 — 计数细菌数量 （ 6 ） 涂布法 — 纸片法药敏试验 （二）细菌的培养方法 1. 需氧培养法 普通培养 2. 二氧化碳培养 （ 1 ）二氧化碳培养箱 （ 2 ）烛缸法 （ 3 ）化学法 3. 厌氧培养 （三）细菌的生长现象 1. 固体培养基上的生长现象 ? 菌落 ：单个细菌在培养基上分裂繁殖成一堆 肉眼可见的细菌集团。 ? CFU ：菌落形成单位，活菌计数用 ? 细菌菌落的描述 大小、形状、突起或扁平、 边缘、颜色、表面、透明度 （ 1 ） 光滑型菌落 （ S 型菌落） 表面光滑、湿润、边缘整齐 （ 2 ） 粗糙型菌落 （ R 型菌落） 表面粗糙、干燥、边缘不齐 （ 3 ） 粘液型菌落 （ M 型菌落） 菌落粘稠、有光泽、似水珠样 卷发样菌落 粗糙型菌落（ L-J ） 粘 液 型 菌 落 2. 液体培养基中的生长情况 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 三、细菌生化反应鉴定 （一）碳水化合物的代谢试验 1. 糖（醇、苷）类发酵试验 ? 原理 各种细菌酶系不同，分解糖（醇、 苷）的能力各异，产物也不同。 ? 培养基 单糖、双糖、三糖、多糖 ? 应用 肠道杆菌科细菌的鉴定 Sugar Fermentation 2. 葡萄糖氧化 / 发酵试验（ O/F ） ? 原理 氧化型 专性需氧菌 发酵型 产碱型 不分解葡萄糖 ? 培养基 Hugh