酶化学概述与反应机制及工程.ppt

酶化学概述和反应机制及工程;第一节　概述 第二节　酶的结构与功能的关系 第三节　酶催化反应机制 第四节 酶促反应动力学 第五节 酶的制备 第六节 酶的多样性 第七节 酶在工业上的应用及酶工程;酶及化学本质 酶的催化特性 酶的组成及分类;一、酶的概念;酶的缺陷症;蛋白质类酶的发现历史;核酸类酶的发现（ribozyme 核酶 R）;二、酶的催化特性　　101页;（二）酶作为生物催化剂的特点;3.酶具有高度专一性 4.酶的活性受到调节和控制 调节酶的浓度：诱导或抑制酶的合成；降解。 通过激素调节酶活性： 反馈抑制调节酶活性： 抑制剂和激活剂对酶活性的调节： 别构调控、酶原激活、酶的可逆共价修饰和同工酶。;三、酶的组成及分类（蛋白类酶）;2.根据酶的结构特点及分子组成形式分为;②寡聚酶（oligomeric enzymes）;③多酶体系（multienzymes system）：;3.酶的命名与分类;（3）国际系统分类法及酶的编号（蛋白类酶）;酶的编号的举例—ATP葡萄糖磷酸转移酶(已糖激酶);第二节 酶的结构与功能的关系;酶分子的结构特点;一、酶的一级结构与催化功能的关系;Ｈ＋或胃蛋白酶;酶原激活;胰凝乳蛋白酶原的激活;胰蛋白酶原的激活;胃蛋白酶原激活过程;酶级联反应：;共价修饰　;二、酶的活性与高级结构的关系;例：胰凝乳蛋白酶的肽链折叠（示活性中心）;2.二、三级结构与活性中心的关系;酶活性中心的特点;酶的必需基团与活性中心;酶的调控部位(Regulatory site);3.聚合与解聚(四级结构与酶活性的关系);4.同工酶;乳酸脱氢酶同工酶（LDH，存在于哺乳动物中的有五种）;M4 HM3 H2M2 H2M H3M H4;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱;研究同工酶的意义;第三节　酶催化反应的机制;一、酶促反应的本质;中间产物假说----酶的工作方式;中间产物假说证据;二、酶反应机制;１.酶作用专一性的机制;②诱导契合假说（induced–fit hypothesis) ;“三点结合”的催化理论;2.酶作用高效性的机制;1.底物与酶的邻近效应与定向效应(反应速率提高108) 　;2.底物形变和诱导契合;3.共价催化(covalent catalysis)　 110页;4.酸－碱催化(acid-base catalysis);广义酸基团 　　　 广义碱基团 （质子供体） 　　　 （质子受体）;5.金属离子催化作用;第四节 酶促反应动力学　　111页;反应速率及其测定;酶促反应的影响因素;一、底物浓度对酶促反应速率的影响;1. 反应动力学;2. 动力学方程式(单底物反应）;米氏方程的推导;②根据中间产物学说，酶促反应分两步进行;式中：Km为米氏常数，是ES的分解速度和形成速度的比值。;3. Km（米氏常数）和Vmax （最大反应速度）;(1)Km值的求法;Lineweaver–Burk的作图法 — 双倒数作图法;通过实验测定Km和Vmax的方法;(2)Km是酶学研究中的重要数据;对活细胞的实验表明 酶的底物浓度通常就在这种底物的Km值附近 不是大大高于或大大低于Km?;（3）酶的Km值与米氏方程的实际用途;例：;二、酶浓度对酶促反应速率的影响;三. 温度对酶促反应速率的影响;高温杀菌与低温保鲜的生化机理？;四. pH对酶促反应速率的影响;pH对酶促反应速率的影响机理;五. 激活剂对酶反应速率的影响;六、抑制剂对酶促反应速率的影响 ;抑制剂（inhibitor)----一般具备两个方面的特点;1．抑制作用的类型;（1）不可逆抑制作用（irreversible inhibition);常见不可逆抑制剂;DFP、1605、敌百虫;神经肌接头放大示意图;（2）可逆抑制作用(reversible inhibition);①竞争性抑制作用;丙二酸、苹果酸及草酰乙酸皆和琥珀酸的结构相似，是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂。 ;磺胺药抑菌机理;利用竞争性抑制的原理设计药物;②非竞争性抑制作用;③反竟争性抑制作用;3. 抑制作用的动力学－－ Km和Vmax的变化;竞争性抑制作用曲线及特点;②非竞争性抑制作用的速率方程;非竞争性抑制作用曲线及特点;③反竞争性抑制作用的速率方程;反竞争性抑制作用曲线;三种可逆抑制剂的区别　１２１页表６－６;第五节　酶的制备;一、酶的制备及纯化;1.酶的提纯要进行的工作;2.基本原则;3.基本操作程序;二、酶活性的测定（酶的定量测定）;二、酶活性的测定;1.酶活力（酶活性）---酶的定量测定;酶的活力单位（enzyme unit,酶活力单位表示）;习惯单位;酶活性测定优化条件;测定酶活力一般经如下几个步骤;2.酶的比活力－－表示酶纯