细胞工程》第4章动物细胞培养工程ppt演示课件.ppt

4．4．4 培养过程的监测与控制 4．4．5 动物细胞培养工艺 4．4．6 工艺的选择与设计（反应器投入占整个部分50%） B、生产工艺的设计原则 4．4．7 杂交瘤细胞大规模培养制备  抗体的工艺 A、工艺流程图 ——肝癌单抗片段Hab18F（ab/）2体外制备工艺 B、主要设备 1L悬浮搅拌培养瓶Superspinner（德，BraunBiotech） ——杂交瘤细胞悬浮培养种子细胞 （磁力搅拌无气泡供气，10um细胞连续 旋转过滤器，其它全控） 5L细胞发酵罐（德国，BraunBiotech） ——杂交瘤细胞连续悬浮培养 30L细胞发酵罐BiostatRC20（德国，BraunBiotech） （冷热循环蒸汽控温，四气混合控制供气） ——杂交瘤细胞连续悬浮培养的放大 生物反应器 生物反应器的操作 生物反应器的监控系统 生物反应器连接和排流管道 低温调整离心机 系统控制面板 国产生物反应器及操作 C、无血清流加培养工艺 4．5 动物细胞培养过程的 放大与优化4．5．1 动物细胞培养工艺的研究 A、开发重要性： 真核细胞表达产物糖基化，有疗效； 动物细胞体外培养广泛应用于基因工程蛋白质与病毒疫 苗等生产；动物细胞表达产品十分昂贵，开发周期长， 研发成本高，技术难度大；如：美国，Immunex公 司，已被Amgen公司兼并，生产治疗风湿性关节炎蛋白 药物，2．6g/人、年×6154美元/g=16000美元，2002 年，销售额达8.02亿美元，其中，被替代损失10亿，因 为产量低，计划投入数亿美元，耗时3-5年，扩大规 模、优化生产工艺，提高产量 B、主要内容： 生产工艺的放大、生产工艺的稳定性和重复性 C、初步研究： 首先必须较快建立一个基本（不要求是最优）的细 胞培养工艺。 4．5．2 动物细胞培养工艺的优化 A、影响蛋白质产量的关键参数， 营养物耗尽； B、决定细胞浓度 有毒废物的积累 的关键参数 培养物理条件的恶化 提高蛋白质表达水平 C、细胞培养工艺 细胞新陈代谢的控制 优化策略 流加工艺的优化 4．5．3 动物细胞培养工艺的放大 A、生物反应器尺寸放大 鼓泡 B、氧气的传输 提高氧气传递的其它方法 搅拌速率和搅拌器的设计 C、混合 剪切力和细胞损伤 D、工业生产中的动物细胞培养 4．6 动物细胞代谢工程 4．6．1 概述 A、生命的代谢活动是通过活细胞和细胞 群的代谢网络进行的，后者由一系列酶催化 的级联化学反应以及特异性的膜转移系统所 构成。然后，活细胞这种自身固有的代谢网 络相对实际应用而言，其遗传特性并非最 佳，需要对细胞代谢途径进行修饰； 4．3．4 动物细胞培养用生物反应器 4．3．5 培养环境与生物反应器 A、原因 ● 动物细胞生长、代谢和产物生成受培养环境的控制，而生物反应器提供的培养环境能否满足需要，直接与反应器的型式、操作状态有关； ● 为了给细胞生长提供足够的溶氧水平和均一的培养环境，必须使反应器的保持一定的混合水平和通气条件； ● 动物细胞较大、无壁，它对流体作用力敏感（剪切敏感性），易损，所以，反应器的设计、放大和操作过程必须解决供氧混合与细胞损伤间的矛盾； ● 必须了解生物反应器的传质与混合特性、培养环境液体力学现象对动物细胞生长、代谢及细胞操作的影响； B、具体关系： ● 动物细胞对培养环境传质和混合的要求 对于大规模动物细胞培养过程，其生物反应器提供的细胞培养环 境必须满足细胞生长、代谢和产物生成对传质和混合的要求，主要 因素是细胞生长对氧的要求； 反应器的传质能力必须满足：KLA（C*O2-CO2·min）≥qO2·C，其中， KL——液体一侧氧传质系数，A——气液比表面积， qO2——单位细胞耗速率，C——细胞密度， C*O2——液体中氧的饱和浓度，CO2·min——液体中最低氧浓度。 一般而言， 提高反应器的能量输入，如增加搅拌转速和通气量 减少气泡直径等，有利于提高传质速率，但增加细 矛盾